Catalasa y deshidrogenasa láctica

Catalasa y deshidrogenasa láctica
Introducción
El subgrupo 1.11. de la clasificación de las enzimas incluye proteínas que utilizan el peróxido de hidrogeno como oxidante. La catalasa (E.C.1.11.1.6) (peróxido de hidrogeno: peróxido de hidrogeno oxireductasa) es una enzima ampliamente distribuidos en la naturaleza y muy importante pues su función es la destrucción del peróxido de hidrogeno,producto de varias oxidaciones biológicas. Es muy semejante en estructura y función a la peroxidasa.
La descomposición del peróxido de hidrogeno se puede considerar como la oxidación de una molécula por otra. De ahí que la siguiente ecuación describa la reacción:
Catalasa
H2O2 + H2O2 O2 + 2H2O2
La catalasa del hígado además del peróxido de hidrogeno puede utilizar comosustrato, alquilos de peróxido, (R-O-O-R) y como segunda molécula puede utilizar varias sustancias orgánicas, como donadoras de hidrogeno. Por ejemplo etanol, formato, acido nitroso, compuestos de tiol y pirogalol.
La enzima comúnmente distribuida en las células aeróbicas, tiene un peso molecular de 250,000 con cuatro grupos heme y un átomo de hierro en el centro de cada heme. El mecanismo dereacción es a través de la formación de un complejo catalasa-peróxido de hidrogeno.

Fundamento de la práctica
La reacción normal se da y rápidamente con solo mezclar peróxido de hidrogeno con sangre diluida 1:50. La catalasa de la sangre es una de las más activas y esta concentrada prácticamente en los glóbulos rojos. Veremos en la práctica, en un tubo de ensaye la reacción normal y en otros elefecto de algunos inhibidores como el cianuro, el nitrato de plomo o el calentamiento a altas temperaturas.
El efecto inhibidor del cianuro se debe a la combinación de este con el hierro, presente en la molécula de la catalasa. El nitrato de plomo inhibe por ser
metal por coagulación de las proteínas.

Materiales :
Gradillas
Vaso de precipitado 500 ml.
4 pipetas de 5ml.
9 tubos de ensayede 12 x 100
Pinzas para tubos
Tela de asbesto

1. En una gradilla coloque cuatro tubos de ensaye numerados del 1 a 4
2. Pipetee 2.0ml de peróxido de hidrogeno al 3% a cada uno de los 4 tubos
3. Agregue 5 gotas de cianuro de sodio al 5% al tubo no.3
4. Agregue 5 gotas de nitrato de plomo al 5% al tubo no. 4
5. En un tubo de ensaye aparte, tome 3ml de sangre diluida 1:50, y caliéntelosen agua hirviendo por cinco minutos. Agréguelos al tubo no.2
6. Mezcle bien, y cubra los tubos con una capita de aceite mineral, inclinando los tubos y dejando que el aceite corra por la pared del tubo lentamente
7. Coloque los tubos en baño de agua a 37°C y observe el resultado a los 3,6,9,12 y 15 minutos. Ocasionalmente agite suavemente los tubos


DESHIDROGENASA LACTICA.
Introducción
Ladeshidrogenasa láctica es una enzima que cataliza la reducción reversible del piruvato a lactato, utilizando la coenzima NADH como agente reductor. Esta reacción es el paso terminal que caracteriza la glucolisis en el musculo de los vertebrados y que la diferencia de otras formas fermentativas anaerobias del catabolismo de los carbohidratos.
La enzima pertenece al grupo de las Oxidoreductasas(E.C.1.1.1.27.) (L-Lactato: NAD—Oxidoreductasa), la forma enzimática mas común tiene un peso molecular de 140,000, pero todas las de los vertebrados están compuestas por tetrámeros, con cuatro sitios catalíticos independientes cada tetrámero. La enzima completa puede disociarse, con perdida de actividad, a cuatro subunidades de 35,000 de peso molecular cada una. Por los desnaturalizantes comunesde las proteínas como son la urea, el cloruro de guanidino el SDS (dodecil-sulfato de sodio).

Fundamento de la práctica
Aquí la fuente de la enzima será una suspensión de levaduras al 20%. En la practica el azul de metileno se utiliza como aceptor de hidrogeno, pues posee la propiedad muy útil de cambiar de color al pasar de oxidado a reducido. Es azul de metileno cuando esta oxidado y...