Catalisis encimatica

CATÁLISIS ENZIMÁTICA
 
32.- Se ha descrito un método para la determinación de glucosa usando la enzima glucosa-oxidasa. En presencia de oxígeno y agua, la enzima cataliza la producción de ácido glucónico y peróxido de hidrógeno a partir de la glucosa, el reactivo limitante. El peróxido de hidrógeno oxida al ferrocianuro potásico, el cual se analiza por una variedad de métodos. En lugar de medirel cambio de señal desde tiempo cero a tiempo t, se fijan las condiciones experimentales de forma que las disoluciones de muestra y reactivo se mezclen al principio de la reacción. Se registra la diferencia de señal entre dos detectores colocados al principio y final de la línea de reacción. Si está presente la glucosa reaccionará y la diferencia de señal indicará la cantidad de glucosa medida.Una solución estándar de glucosa de 100 mg l-1 se prepara y determina por dicho método. Una disolución desconocida, después de concentrada cinco veces, se analiza por el mismo procedimiento, dando una diferencia de señal de 18.0 divisiones. Suponiendo que el registrador está preparado para leer 100 divisiones de la disolución patrón de glucosa, ¿cúal es la concentración de glucosa en la muestradesconocida?.
 
 
33.- La cistina actúa como catalizador en la reducción de yodo por la azida sódica. Se ha descrito un método cinético para el análisis de cistina en el que el cambio en la concentración de yodo se mide potenciométricamente. Por comparación automática de la velocidad inicial del cambio de la señal potenciométrica producida por un integrador electrónico, se pudo obtener unalectura numéricamente equivalente a la concentración de cistina en mg l-1. Una muestra biológica de 5.00 g se desnaturalizó, extrajo, centrifugó, y posteriormente se trató para producir una muestra de 10.0 ml que contenía la cistina. A la célula de reacción se le añadió 1.00 ml de una disolución que contenía la azida sódica, yodo y yoduro, y 1.00 ml de solución de cistina. La lectura fue de 5.20.Calcular la concentración de cistina en la muestra biológica en mg l-1 y en % en peso.
 
 
34.- El nivel de glucosa en una muestra de sangre se determina midiendo la cantidad de producto B formado después de 30 minutos de incubación a 37 ºC, de acuerdo con las siguientes reacciones:
 
Glucosa oxidasa
C6H12O6 + H2O + O2 C6 H12O7 + H2O2
 
A + H2O2B
(colorante orgánico) (producto coloreado)
 
0.5 ml de una muestra de sangre se tratan adecuadamente para precipitar las proteinas, se diluye a 10.0 ml y después se filtra. A una alícuota del filtrado de 0.2 ml en un tubo de ensayo se le añade la enzima estándar que contiene el colorante orgánico A. Después de 30 minutos se añade H2SO4 para parar la reacción y se determina laabsorbancia del producto coloreado espectrofotométricamente a 540 nm, obteniéndose un valor de 0.124 unidades de absorbancia. De idéntica manera, se tratan los patrones que contienen 1.00 mg ml-1 y 3.00 mg ml-1, dando absorbancias de 0.100 y 0.300, respectivamente. Calcular el nivel de glucosa en sangre expresado en mg% (1 mg %= 1 mg / 100 ml de sangre)
 
 
35.- Se ha descrito un método para ladeterminación de glucosa usando la enzima glucosa oxidasa. En presencia de oxígeno y agua, la enzima cataliza la formación de ácido glucónico y peróxido de hidrógeno a partir de la glucosa, el reactivo limitante.
El peróxido de hidrógeno reacciona con yoduro, oxidándose a yodo que se mide potenciométricamente. En este sistema , se mide el tiempo necesario para que se forme una cierta cantidad fija deproducto. La inversa de este tiempo de reacción es proporcional a la concentración de glucosa en la muestra.
0.200 ml de una muestra de sangre se diluyeron y desproteneizaron, siendo el volumen final de 10.0 ml. 1.00 ml de esta disolución se añadió a la célula de reacción con 1.00 ml de una disolución que contenía todo excepto glucosa. El tiempo de reacción de la muestra desconocida de sangre fue...