catalisis

TIROSINASA ( PARTE I)
Auris Carrillo Martinez3, Yornei Pérez Contreras3
Facultad de educación y ciencias quinto semestre. Bioquímica II; grupo 2; puesto3.
Universidad de Sucre; puerta roja
RESUMEN
En el presente ensayo se llevo a cabo la extracción de la enzima tirosinasa de diferentes frutas ( banano y aguacate), a dicha enzima se le determino su actividad catalítica utilizando comosustrato L-DOPA, el cual es un compuesto incoloro y que al reacción con la tirosinasa da como resultado la formación de DOPA-CROMO, de color café oscuro. Seguidamente se utilizo el fotocolorímetro con el cual comparamos las mediciones de las absorbancias, las cuales nos indicaron que tanto fue la cantidad de L- DOPA que reacciono. Debemos resaltar que al comparar la actividad de la tirosinasa en losdiferentes medios de extracción se nos dificulto un poco, debido a que la mayoría de las absorbancias del aguacate dieron negativas, posiblemente por causa de errores en los procedimientos. Además comparamos la acción catalítica de dicha enzima sometida a diferentes condiciones como calor y la presencia de inhibidor (cianuro de sodio); encontrando así que su actividad disminuyo al someterse adichas condiciones. Esto nos da a entender que la estructura nativa de la enzima se altera y al reaccionar con L-DOPA la coloración que se produce no será muy fuerte, es decir que hay poca actividad catalítica.

PALABRAS CLAVES: Tirosinasa, L-DOPA, DOPA-CROMO, actividad catalítica, inhibidor.
INTRODUCCION
Es un hecho de observación frecuente que las patatas, manzanas, plátanos y otras frutasadquieren una coloración marrón al ser dañadas o cortadas. Esto se debe a la conversión del aminoácido tirosina en el pigmento melanina de acuerdo con la siguiente secuencia de reacciones donde la acción de la enzima tirosinasa sobre el aminoácido tirosina, que en presencia de oxigeno, lo va convirtiendo secuencialmente en dopa, dopaquinona y dopacromo (café oscuro), hasta que termina en un pigmentomuy oscuro llamado melanina.




El resultado de color oscuro se conoce como pardeamiento enzimático es una reacción de oxidación en la que interviene como substrato el oxígeno molecular, catalizada por un tipo de enzimas que se puede encontrar en prácticamente todos los seres vivos, desde las bacterias al hombre. En el hombre es la responsable de la formación de pigmentos del pelo y de lapiel. en los cefalópodos produce el pigmento de la tinta, y en los artrópodos participa en el endurecimiento de las cutículas del caparazón, al formar quinonas que reaccionan con las proteínas, insolubilizándolas. En los vegetales no se conoce con precisión cuál es su papel fisiológico.

El enzima responsable del pardeamiento enzimático recibe el nombre de polifenoloxidasa, fenolasa otirosinasa, en este último caso especialmente cuando se hace referencia a animales, ya que en ellos la tirosina es el principal substrato. También se ha utilizado el término cresolasa, aplicado a la enzima de vegetales. Se descubrió primero en los champiñones, en los que el efecto de pardeamiento tras un daño mecánico, como el corte, es muy evidente.

En la siguiente práctica de laboratorio se extraerá laenzima trosinasa de diferentes fuentes como lo son el banano y aguacate. Además se determinara la actividad de la tirosinasa, utilizando como sustrato L-DOPA. Para finalizar se compararan los resultados de la actividad de la tirosinasa en las fuentes utilizadas.

MATERIALES
Solución de fosfato 0.1M en buffer (pH= 7.2)
Solución de L- DOPA0.03M en buffer (pH= 6.0)
Fuentes de tirosina:banano y aguacate
Tela para filtrar
Mortero
Fotocolorímetro
Hielo

PROCEDIMIENTO

Se tomaron 15 gr de banano y se le agregaron 60ml de buffer de fosfato pH= 6 más 1 cucharada de arena. Luego se macero durante unos minutos y posteriormente se filtro con la ayuda de una tela. El filtrado fue llevado a la centrifugadora durante 5 minutos; luego el sobrenadante fue introducido en hielo para...