CelAnimals
Páginas: 31 (7579 palabras)
Publicado: 8 de julio de 2014
CAPÍTULO 9
Medios y suplementos definidos
9.1 DESARROLLO DE LOS MEDIOS DE COMUNICACIÓN
Los primeros intentos de cultivar células se realizaron en recursos naturales los medios de comunicación basados en extractos de tejidos y fluidos corporales, tales como polluelo extracto de embrión, suero, linfa, etc, con la propagación de líneas celulares, la demanda de una mayor cantidad de un medio decalidad más consistente conducido a la introducción de medios químicamente definidos sobre la base de análisis de fluidos corporales y bioquímica nutricional. Medio basal de Eagle [Eagle, 1955] y, posteriormente, medio esencial mínimo de Eagle (MEM) [Eagle, 1959] llegó a ser ampliamente adoptado diversas suplementado con ternera, humano, o suero de caballo, proteína hidrolizados, y el extracto deembrión. Como célula más continuo las líneas estaban disponibles (células L929, HeLa, etc), era evidente que estos medios eran perfectamente adecuado para la mayoría de los esas líneas, y la mayoría de los desarrollos posteriores fueron destinada a sustituir el suero (véase la Sección 10.2), optimización de medios para diferentes tipos de células (por ejemplo, medio RPMI 1640 para linfoblastoidelíneas de células), o la modificación de las condiciones específicas (por ejemplo, Leibovitz L15 a eliminar la necesidad de la adición de CO2 y NaHCO3) [Leibovitz, 1963].
El aislamiento y la propagación de células de un linaje específico puede requieren un medio libre de suero selectivo (véase la sección 10.2.1), mientras que las células cultivadas para la formación de productos, como anfitrionespara la propagación viral, o para estudios moleculares no específicos de la célula se basan principalmente en MEM de Eagle [Eagle, 1959], de Dulbecco modificación del medio de Eagle, medio DMEM [Dulbecco y Freeman, 1959], o, cada vez más, RPMI 1640 [Moore et al., 1967], suplementado con suero. Sin embargo, muchos técnicas de producción a escala industrial utilizan ahora libre de suero medios decomunicación, para facilitar los procesos posteriores y reducir el riesgo de agentes infecciosos adventicias (véase la Sección 10.1). la compromiso popular para muchos laboratorios es una mezcla de un medio complejo, tales como F12 de Ham [jamón, 1965], con uno con más alta de aminoácidos y las concentraciones de vitamina, tales como DMEM. Esta alternativa se horrorizan los puristas, pero sí generar unmedio útil, todo uso de cultivos primarios como así como la propagación de la línea celular.
Este capítulo se centra en los principios generales de la composición del medio, utilizando el ampliamente utilizado suero medios suplementados como ejemplos, y el Capítulo 10 se centrarán en el diseño y uso de medios libres de suero.
9.2 PROPIEDADES FISICO
9.2.1 pH
La mayoría de las líneascelulares crecen bien a pH 7,4. Aunque la óptima pH para el crecimiento celular varía relativamente poco entre los diferentes cepas de células, algunas líneas de fibroblastos normales funcionan mejor a pH 07.04 a 07.07, y las células transformadas pueden hacer mejor a un pH de 7,0 a 7,4 [Eagle, 1973]. Se informó de que las células epidérmicas pueden ser mantenido a pH 5.5 [Eisinger et al., 1979], peroeste nivel ha no se ha adoptado universalmente. En casos especiales puede resultar conveniente hacer un breve experimento de crecimiento (ver Protocolos 21.7 y 21.8), el ensayo de eficiencia de plaqueo (ver sección 21.10), o análisis de función especial (por ejemplo, véase la Sección 17.7) para determinar el pH óptimo.
Rojo fenol se usa comúnmente como un indicador. Es de color rojo en pH 7,4 y seconvierte en naranja a un pH de 7,0, de color amarillo a un pH de 6,5, amarillo limón debajo de pH 6,5, más rosa a pH 7,6, y púrpura a pH 7,8 (véase la lámina 22b). Debido a que la evaluación del color es altamente subjetiva, es útil para hacer un conjunto de normas el uso de una solución estéril salina equilibrada (BSS) con rojo fenol a la concentración correcta, en el mismo tipo de botella,...
Medios y suplementos definidos
9.1 DESARROLLO DE LOS MEDIOS DE COMUNICACIÓN
Los primeros intentos de cultivar células se realizaron en recursos naturales los medios de comunicación basados en extractos de tejidos y fluidos corporales, tales como polluelo extracto de embrión, suero, linfa, etc, con la propagación de líneas celulares, la demanda de una mayor cantidad de un medio decalidad más consistente conducido a la introducción de medios químicamente definidos sobre la base de análisis de fluidos corporales y bioquímica nutricional. Medio basal de Eagle [Eagle, 1955] y, posteriormente, medio esencial mínimo de Eagle (MEM) [Eagle, 1959] llegó a ser ampliamente adoptado diversas suplementado con ternera, humano, o suero de caballo, proteína hidrolizados, y el extracto deembrión. Como célula más continuo las líneas estaban disponibles (células L929, HeLa, etc), era evidente que estos medios eran perfectamente adecuado para la mayoría de los esas líneas, y la mayoría de los desarrollos posteriores fueron destinada a sustituir el suero (véase la Sección 10.2), optimización de medios para diferentes tipos de células (por ejemplo, medio RPMI 1640 para linfoblastoidelíneas de células), o la modificación de las condiciones específicas (por ejemplo, Leibovitz L15 a eliminar la necesidad de la adición de CO2 y NaHCO3) [Leibovitz, 1963].
El aislamiento y la propagación de células de un linaje específico puede requieren un medio libre de suero selectivo (véase la sección 10.2.1), mientras que las células cultivadas para la formación de productos, como anfitrionespara la propagación viral, o para estudios moleculares no específicos de la célula se basan principalmente en MEM de Eagle [Eagle, 1959], de Dulbecco modificación del medio de Eagle, medio DMEM [Dulbecco y Freeman, 1959], o, cada vez más, RPMI 1640 [Moore et al., 1967], suplementado con suero. Sin embargo, muchos técnicas de producción a escala industrial utilizan ahora libre de suero medios decomunicación, para facilitar los procesos posteriores y reducir el riesgo de agentes infecciosos adventicias (véase la Sección 10.1). la compromiso popular para muchos laboratorios es una mezcla de un medio complejo, tales como F12 de Ham [jamón, 1965], con uno con más alta de aminoácidos y las concentraciones de vitamina, tales como DMEM. Esta alternativa se horrorizan los puristas, pero sí generar unmedio útil, todo uso de cultivos primarios como así como la propagación de la línea celular.
Este capítulo se centra en los principios generales de la composición del medio, utilizando el ampliamente utilizado suero medios suplementados como ejemplos, y el Capítulo 10 se centrarán en el diseño y uso de medios libres de suero.
9.2 PROPIEDADES FISICO
9.2.1 pH
La mayoría de las líneascelulares crecen bien a pH 7,4. Aunque la óptima pH para el crecimiento celular varía relativamente poco entre los diferentes cepas de células, algunas líneas de fibroblastos normales funcionan mejor a pH 07.04 a 07.07, y las células transformadas pueden hacer mejor a un pH de 7,0 a 7,4 [Eagle, 1973]. Se informó de que las células epidérmicas pueden ser mantenido a pH 5.5 [Eisinger et al., 1979], peroeste nivel ha no se ha adoptado universalmente. En casos especiales puede resultar conveniente hacer un breve experimento de crecimiento (ver Protocolos 21.7 y 21.8), el ensayo de eficiencia de plaqueo (ver sección 21.10), o análisis de función especial (por ejemplo, véase la Sección 17.7) para determinar el pH óptimo.
Rojo fenol se usa comúnmente como un indicador. Es de color rojo en pH 7,4 y seconvierte en naranja a un pH de 7,0, de color amarillo a un pH de 6,5, amarillo limón debajo de pH 6,5, más rosa a pH 7,6, y púrpura a pH 7,8 (véase la lámina 22b). Debido a que la evaluación del color es altamente subjetiva, es útil para hacer un conjunto de normas el uso de una solución estéril salina equilibrada (BSS) con rojo fenol a la concentración correcta, en el mismo tipo de botella,...
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