celulas competentes

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Serrano-Rivero, Yunier; Hernández-García, Armando; Fando-Calzada, Rafael
Comparación de dos métodos para la preparación de células competentes en Escherichia coli
Revista CENIC. Ciencias Biológicas, vol. 44, núm. 2, mayo-agosto, 2013
Centro Nacional de Investigaciones CientíficasCiudad de La Habana, Cuba
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Revista CENIC Ciencias Biológicas, Vol. 44, No. 2, mayo-agosto, 2013.

Comparación de dos métodos para la
preparación de células competentes en
Escherichia coli

Yunier Serrano-Rivero, Armando Hernández-García y Rafael Fando-Calzada.
Dpto. Biología Molecular, Dirección de Enfermedades Infecciosas, Centro Nacional de InvestigacionesCientíficas, Apartado
postal 6412, La Habana, Cuba. yunier.serrano@cnic.edu.cu.
Recibido: 20 de julio de 2012.

Aceptado: 12 de noviembre de 2012.

Palabras clave: células competentes, transformación, cloruro de calcio, shock térmico.
Key words: competent cells, transformation, calcium chloride, thermal shock.

La transformación genética es un proceso mediante el cual la célula captamoléculas de
ADN libre y las mantiene en su interior en forma de un replicón extracromosómico o
las incorpora a su genoma por recombinación homóloga.1 Muchas bacterias pueden
activamente incorporar ADN exógeno mediante una capacidad genéticamente
programada denominada competencia natural.1,2 El estado de competencia natural
nunca ha sido demostrado directamente en Escherichia coli y en la mayoría delos
casos, se emplea el término de transformación genética en lugar de permeabilización
artificial del ADN.1
Un proceso de transformación genética consta de cuatro etapas que son comunes para
todas las bacterias y necesarias para la detección exitosa de los transformantes. Estas
etapas son: (i) el desarrollo de un estado de competencia en la célula, (ii) la unión de la
molécula de ADN a lasuperficie celular, (iii) su entrada y procesamiento y, (iv) la
expresión fenotípica del nuevo genotipo resultante.3 Por otra parte, la introducción de
un vector plasmídico es esencial y constituye la primera etapa en los trabajos de
Biología Molecular. Usualmente se emplea el tratamiento con sustancias químicas y la
electroporación para la transformación artificial de E. coli.4-6 También sehan
reportado otros métodos menos comunes como la biobalística, el tratamiento con
polietilenglicol, el ultrasonido y las microondas.7
El mecanismo exacto por el cual el cloruro de calcio media el proceso de
transformación artificial sigue siendo una incógnita. Resultados previos sugieren que el
calcio facilita la adsorción del ADN sobre la superficie celular y el shock térmico
permite laentrada del ADN adsorbido al citoplasma de la célula.8 Se postulan dos
modelos que explican el mecanismo de transformación inducida de las células
bacterianas.9 Según el primer modelo, el ADN libre se une a un receptor en la
membrana celular y es transportado a través de canales, ya sea en forma circular o
linear. Este modelo se basa en el papel importante que representan los canales formadospor el complejo poli-β-hidroxibutirato (PHB)/calcio/polifosfato en la captación y
entrada de moléculas de ADN. 9,10 El segundo modelo asume que el shock térmico
desestabiliza la membrana celular, de manera que favorece la entrada del ADN a la
célula a través de poros temporales formados en aquella.9
El método clásico de preparación de células competentes de E.coli con cloruro de calcio
y...