Celulas Madre tecnicas

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Células Madre, Sección Técnica

TÉCNICAS
Indice de materias
1. INTRODUCCIÓN HISTÓRICA Y CONCEPTOS ACTUALES DEL CULTIVO DE CÉLULAS
MADRE
2. MÉTODOS DE CULTIVO
a. Aislamiento
i. Células Madre embrionarias
ii. Células Madre adultas
iii. Células Madre fetales
b. Derivación
c. Diferenciación
3. CARACTERIZACIÓN
4. BIOLOGÍA DE LA CÉLULA EN CULTIVO. CONDICIONES DECULTIVO
a. El medio de cultivo
i. Medio
ii. Hormonas y factores de crecimiento
iii. Inhibidores del crecimiento de contaminantes
b. El substrato
i. Plástico
ii. Soportes celulares
c. Métodos de disgregación celular
i. Mécanicos
ii. Químicos
iii. Enzimáticos
5. EL LABORATORIO DE CULTIVO CELULAR
a. Cabinas de flujo laminar
b. Incubador de CO2
c. Placas calefactoras.
d. Instrumentosópticos de observación: microscopio de contraste de fases invertido
e. Congeladores e instalacion de criogenia (depósito de N2 liquido)
f. Equipo de esterilización
i. Equipo de filtración
ii. Autoclave
iii. Mechero Bunsen
g. Otros instrumentos
i. Pipeteadores
ii. Centrífugas
iii. Equipos de purificación de agua
iv. Magdem
v. Contador electrónico de células

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1. INTRODUCCION HISTÓRICA Y CONCEPTOS ACTUALES DEL CULTIVO DE CÉLULAS MADRE
Catorce años después del aislamiento inicial de las Células Madre de los blastocitos de ratón, Thompson
y colaboradores, en la Universidad de Wisconsin (Madison, WI) establecieron por primera vez, Células
Madre embrionarias de primate a partir de blastocitos demonos Rhesus.
Después, en 1998, fueron capaces de derivar Células Madre Embrionarias humanas (hESCs) de
blastocitos humanos. Desde entonces, la derivación de hESCs de la ICM de blastocitos preimplantados
se ha convertido en un procedimiento muy utilizado por la mayoría de científicos en todo el mundo.
Actualmente, el principal objetivo de la investigación de Células Madre (SC) consiste en suderivación
como soporte para la creación de células pre o diferenciadas para su posterior aplicación en medicina
regenerativa. Los campos de aplicación incluyen ensayos clínicos y farmacológicos de enfermedades
neurodegenerativas, cardiovasculares y diabetes, la generación de células donantes universales y la
ingeniería tisular.
Todas las lineas de hESCs aprobadas actualmente con fondosfederales en los EEUU son derivadas
sobre soportes celulares de ratón (feeder layers) y son expuestas a una variedad de productos de origen
animal escasamente definidos. Actualmente, una de las principales preocupaciones es la exposición de
las hESCs a componentes animales, debido al riesgo de contaminaciones por retrovirus y otros
patógenos que pudieran ser transmitidos al paciente (lineas celularesde calidad terapéutica). En los
últimos años se han ido usando feeders humanos (placenta, piel, etc…) para evitar estas posibles
contaminaciones.
Las directrices europeas (2003/94/EC, 2004/24/EC) son muy estrictas en el seguimiento de las
condiciones de las GMPs para la derivación y propagación de las hESCs.
La investigación en SC embrionarias y adultas está en desarrollo y la mejora denuestro conocimiento
sobre su biología puede abrir nuevas perspectivas de futuras terapias para una variedad de
enfermedades como la diabetes tipo I y el Parkinson.
Algunas terapias basadas en el uso de SC están en fase de clínica en animales. En piel y células
hematopoyéticas, la investigación está en una segunda fase, en la cual la corrección de genes en
combinación con la terapia celular esusada para remitir enfermedades hereditarias. En los próximos 2 a
5 años, se prevee que más terapias basadas en SC entrarán en ensayos clínicos, sobre todo en el área
de la regeneración muscular y el daño óseo (Stem Cell Research-Status, Prospects, Prerequisites;
European Molecular Biology Organization).

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