celulas

Objetivo

Analizar la capacidad mitogénica y proliferativa del suero fetal bovino y de sus factores de crecimiento sobre una línea celular de macrófagos de ratón.
Determinar el rol del SFB enla proliferación celular
Determinar el porcentaje apropiado para crecer el cultivo celular.

Materiales y métodos.
1.- Primera etapa: cultivo de células
- Campana de flujo laminar
- Líneacelular melanoma de Ratón B16
- Medio RPMI 1640 + 10% SFB + Antibioticos
- Centrifuga
- Azul tripan
- Cámara Neubauer
- Placa de 12 pocillos
- Medio de cultivo: (RPMI 1640 + 0% SFB + Antibióticos)- Medio de cultivo: (RPMI 1640 + 2% SFB + Antibióticos)
- Medio de cultivo: (RPMI 1640 + 5% SFB + Antibióticos)
- Medio de cultivo: (RPMI 1640 + 10% SFB + Antibióticos)
- Cubre objetos
- PBS
-Tubos eppendorf
- Pipeta 1000

Para comenzar se calentó por fricción manual el tubo ependorff que contenía el vial de células congeladas, posteriormente al interior de la cámara de flujo laminar setomo 1 mL del mismo tubo ependorff y se agrego gota a gota sobre 5 mL del medio 1640 + 10% SFB + Antibióticos y se centrifugo a 1200 RPM por 8 minutos. Luego se tomo 10 µL del vial de células más elmedio y se mezclo con 10 µL de azul Tripán, se homogeneizó y se tomaron 10 µL para contarlas en la cámara de Neubauer.
Después de calcular el número de células, se sembraron en una placa de 12pocillo y en cada pocillo se pusieron x de células, luego cada 3 pocillos se vertió 1 mL de medio de cultivo (RPMI 1640 + 0% SFB + Antibióticos), (RPMI 1640 +2% SFB + Antibióticos), (RPMI 1640 + 5%SFB +Antibióticos) y (RPMI 1640 +10% SFB + Antibióticos) respectivamente.

2.- Segunda etapa: Obtención de células para evaluar efecto proliferativo del SFB.
- Microscopio
- Pocillos con célulascultivadas
- PBS 1X filtrado
- Tripsina 0.25%
- PBS + EDTA
- medio RPMI 10% SFB + Antibióticos
- Centrifuga
- Azul Tripán
- Cámara de Neubauer
- Pipeta 1000
Al pasar 3 días del cultivo celular,...