centrifuga

MATERIALES
Para el material se pidieron: 2 vasos de precipitados de 250 ml, 1 mortero con pistilo, previamente fríos, 3 pipetas de 5 ml,3 pipetas de 1ml,1 embudo pequeño de vidrio, 1 piseta conagua destilada , 1 probeta de 50 ml . Gasa y papel filtro
INSTRUMENTOSLos instrumentos de laboratorio que se utilizaron fueron: Balanza granataria de dos platos, balanza granataria de un plato,centrifuga clínica. Y el microscopio óptico
Para el experimento se utilizaron reactivos, las cuales fueron: Solución de NaCl a 0.35 M Solución amortiguadora tris-HCl 0.2 M pH 8, acetona al 80%, 50 graproximadamente de hojas frescas y verdes* (espinacas, acelgas)
DESARROLLO
Primero se lavaron y sacudieron las hojas con agua corriente perfectamente, después se mantuvieron en frio dentro de una bolsade plástico obscura para asegurar su turgencia.
Se procedió a remover las nervaduras más grandes y pesar solo 30 g. Después de pesarlas, se cortaron y molieron fragmentos pequeños. Y seintrodujeron en un mortero con 60 ml de solución de NaCl 0.35M y 10 ml de solución amortiguadora. Se maceraron y colocaron por un periodo no mayor de 4 minutos, el mortero sobre el hielo para inactivar lasenzimas hidrolíticas que se liberan durante la ruptura celular.
Se pasó a filtrar sobre cuatro capas de gasa, recuperando el homogenizante en el vaso de precipitados, para así equilibrar el peso de lostubos en la balanza granataria de dos platos.
Después, se centrifugó durante 3 minutos a 500 rpm para sedimentar fragmentos de tejido y organelos grandes, y se observaron las muestras con elmicroscopio iniciando con el objetivo de menor aumento. Y luego así poder recuperar el sobrenadante y posteriormente centrifugar a 3000 rpm durante 10 minutos.
Se resuspendió la pastilla (pellet) decloroplastos en 2ml de la solución de NaCl 0.35 M., con una pipeta de 1 ml suave y lentamente hasta que la pastilla se disgregó completamente.
Luego se adicionó 5ml mas de NaCl 0.35 M, a cada tubo, de...