centrifugacion

PRACTICA N° 7
CENTRIFUGACIÓN DIFERENCIAL DE ORGANELOS CELULARES

I. INTRODUCCIÓN

Las células eucariotas tienen organelos que están delimitados por una membrana. Todos ellos pueden serseparados utilizando métodos de centrifugación diferencial y por gradientes de densidad.

La centrifugación es un método que utiliza la propiedad de sedimentación de partículas con base en la masa de lasmoléculas para la separación de partículas de una solución. Una vez obtenido el lisado o homogenado celular se ha de proceder a su fraccionamiento. Una de las técnicas más empleadas es lacentrifugación. Se basa en hacer girar el tubo a gran velocidad de forma que se produzca la acumulación en el fondo del mismo de las partículas que tienden a hundirse por tener una densidad menor que la del medio enque se encuentran.

Así, después de la centrifugación la muestra, homogénea, se habrá separado en dos fracciones: sobrenadante, fracción homogénea que no ha sedimentado, y el sedimento que haquedado adherida al fondo del tubo.

El objetivo de este laboratorio es realizar un fraccionamiento celular e identificar en esté los organelos de células.


II. MATERIALES Y MÉTODOS

MATERIALES Centrifuga
 Tubos de ensayo de 13 x 100 mm
 Pipetas graduadas
 Vasos de precipitados
 Mortero
 Pipeta pasteur
 Material biológico:
 Hígado de pollo fresco
 Hojas de Elodea sp.
Reactivos:
 Buffer de separación:
o Cloluro de sodio 0.15 M

PROCEDIMIENTO

a. Hígado de pollo

1. El hígado de pollo se enjuaga con agua de caño y se desmenuza con las tijeras. Luego secoloca en el mortero y se aplasta y se va echando suero fisiológico hasta que se disuelva.
2. Pasar a los tubos y centrifugar a 3500 rpm durante 7 minutos.
3. Luego de la centrifugación se coloco lasedimentación en los tubos de microcentrífuga y puesto a refrigerar.

b. Hojas de Elodea sp

1. Las hojas de Elodea sp se colocan en el mortero y se aplastan y se les va echando suero fisiológico...