Chelex

Extracción de ADN de tejidos embebidos en parafina por
Chelex-100. ADN de tejidos en parafina por resina quelante
DNA extraction from paraffin embedded tissues by Chelex-100
Yaxsier de Armas1, Virginia Capó1, Efraín González1, Lilian Mederos2, Raúl Díaz2
SUMMARY
Introduction: Paraffin-embedded tissue (PET) is an
invaluable resource for retrospective molecular studies.
Chelex-100 method hasbeen used to DNA extraction from
PET. The DNA obtained is used in Polymerase Chain Reaction
(PCR) technique. In this work, the utility of Chelex-100
method for the detection of Mycobacterium tuberculosis is
showed. Methods: The Hematoxilyn-Eosin and Ziehl-Neelsen
techniques were performed in PET samples from three
patients dying of AIDS. Additionally, Chelex-100 method
was used for DNAextraction from these tissues and two
PCR with different primers were evaluated for identification
of M tuberculosis. Results: Genetic material with a
good quality and in enough quantity was obtained the Chelex-
100 method. M tuberculosis was identified in the samples
by PCR, using a specific sequence (IS 6110). We showed
the utility of Chelex-100 method in PCR from short
DNA fragments.Conclusions: The Chelex-100 method is a
rapid, easy, safe and inexpensive option in molecular Pathology
research.
Key words: DNA extraction; Chelex-100; paraffin;
PCR; mycobacterium tuberculosis.
RESUMEN
Antecedentes: El tejido embebido en parafina (TEP) es
una fuente invaluable para los estudios moleculares retrospectivos.
El método de Chelex-100 ha sido empleado para
la extracción de ADN enTEP con el objetivo de ser utilizado
posteriormente en la técnica de la Reacción en Cadena
de la Polimerasa (RCP). En este trabajo, se describe la utilidad
del Chelex-100 para la detección de ADN de Mycobacterium
tuberculosis de TEP. Métodos: Se realizaron las técnicas
de Hematoxilina-Eosina y Ziehl-Neelsen a TEP de
pacientes fallecidos por SIDA. Adicionalmente, se utilizó el
método deChelex-100 para extraer ADN y evaluar dos juegos
de iniciadores para la detección de M. tuberculosis
empleando la RCP. Resultados: Con el empleo del Chelex-
100 se obtuvo un material genético con buena calidad y cantidad
suficiente. Se identificó M. tuberculosis en las muestras
analizas a través de la amplificación de la secuencia
específica de inserción (IS6110), demostrando la utilidad de
laresina quelante para la RCP de fragmentos cortos. Conclusión:
El método del Chelex-100 brinda una opción
menos costosa, rápida, fácil y segura para los estudios moleculares
en Anatomía Patológica.
Palabras claves: extracción ADN; Chelex-100; parafina;
RCP; mycobacterium tuberculosis.
Recibido el 21/4/06. Aceptado el 19/6/06.
1 Departamento de Anatomía Patológica del Instituto de MedicinaTropical «Pedro Kourl».
2 Laboratorio Nacional de Referencia e Investigaciones de Tuberculosis y Micobacterias del Instituto de Medicina Tropical «Pedro Kourl».
yaxsier@ipk.sld.cu
TÉCNICAS EN PATOLOGÍA REV ESP PATOL 2006; Vol 39, n.º 3: 171-174
Rev.

INTRODUCCIÓN
El análisis de los ácidos nucleicos se ha convertido en
una herramienta importante en el diagnóstico e investigación
en patologíamolecular. El material más comúnmente
analizado en los laboratorios de esta disciplina es el tejido
embebido en parafina (TEP) (1). El material biológico
conservado de esta forma constituye una fuente incalculable
de información en investigaciones de carácter retrospectivo.
Sin embargo, la obtención de ADN genómico de
alta calidad a partir de TEP es una tarea difícil (2).
En la últimadécada se han publicado varios métodos
para la extracción y obtención de ADN a partir de
TEP. Algunos protocolos, por ejemplo, utilizan diferentes
tiempos de incubación para el tratamiento proteolítico
de las muestras (3), otros emplean solventes orgánicos
adicionales como fenol y cloroformo, antes de la
precipitación con etanol (4). Existen metodologías
alternativas, que utilizan la lisis...