Ciclo Del Glioxilato

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA METROPOLITANA
UNIDAD IZTAPALAPA

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División de Ciencias Básicas de la Sal
LABORATORIO DE BIOQUIMICA MICROBIANA

Practica 3

Ciclo del glioxilato


INTRODUCCIÓN
Ciclo del glioxilato
El ciclo del glioxilato, es una forma modificada del ciclo de los ácidos tricarboxílicos (también conocido como ciclo de Krebs), tiene lugar en la mayor partede las plantas y microorganismos pero este no ocurre en animales superiores [1] y es la fuente de oxaloacetato más importante [2].
El objetivo principal del ciclo que fue delineado por Krebs y H.R. Kornbreg, es el de permitir a las plantas y a los microorganismos, la utilización de los ácidos grasos o del acetato, en forma de acetil-CoA, como única fuente carbonada para su desarrollo y labiosíntesis de glúcidos a partir de ácidos grasos. Los animales no son capaces de efectuar la síntesis neta de la glucosas a partir de acetato o de ácidos grasos, ya que los dos átomos de carbono se pierden en forma de CO2 en la reacciones del ciclo de los ácidos tricarboxílicos que conducen desde el acetil-CoA al oxaloacetato.
Este ciclo elude mediante un rodeo, las etapas del desprendimiento de CO2 delciclo de los ácidos tricarboxílicos mediante las 5 reacciones siguientes.

1.- Unión de dos moléculas de acetil-CoA con una molécula de oxaloacetato hasta producir citrato.
2.- La producción de isocitrato a partir de citrato (En este paso, cada uno de los ciclos alterna sus vías).
3.- Producción de succinato y glioxilato a partir de isocitrato (1ra reacción característica del ciclo).
4.-Glioxilato se une a acetil-CoA para producir malato (2da reacción característica del ciclo).
5.- Producción de oxaloacetato a partir de malato (oxaloacetato es el encargado de la síntesis de glucosa).
Las enzimas importantes de este ciclo son:
1.-Isocitrato liasa.- Encargada de degradar el isocitrato en succinato y glioxilato
2.-Malato sintasa.- Cataliza la reacción donde se une glioxilato conacetil-CoA, para producir malato.
El resto de las enzimas o reacciones son del ciclo de los ácidos tricarboxílicos
La importancia de este ciclo es la siguiente:
* Da la habilidad a ciertos organismos de crecer en:
Etanol, acetato, ácidos grasos o compuestos constituidos por solo dos carbonos.
* Manera alterna de sobrevivir en ambientes extremos con limitación de nutrientes
* Esregulado según las necesidades celulares de cada organismo.
* Presente en:
Bacterias, algunas plantas, protozoas, levaduras y algunos invertebrados [2]
La producción de oxaloacateto mediante el ciclo del glioxilato, se realiza para la producción de glucosa mediante la gluconeogénesis, la glucosa formada posteriormente puede ser utilizada por la glucolisis y formar los precursores necesariospara la biosíntesis [1]
OBJETIVO
Determinar que un microorganismo emplea el ciclo del glioxilato y bajo que condiciones actúa
MATERIAL
* 12 Tubos de ensaye de 50 mL. con rosca y tapa.
* 12 Tubos de ensaye de 2 mL.
* 1 Probeta graduada de 50 mL.
* 1 vaso de precipitados de 250 mL.
* 1 Vaso de precipitados de 100 mL.
* 1 pipeta de 5 mL.
* 2 Espátulas.
* 1 Asa desiembra.
* 1 Mechero Fisher.
* 1 Piceta con Agua Destilada.
* 1 Piceta con Etanol.
* 1 Parrilla de Agitación.
* 1 Barra Magnética.
* 1 Potenciómetro.
* 2 Pipetas Pasteur.
COMPONENTES Y FORMULACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO.
*Medio 1 *Medio 2
-Glucosa 0.5 % - Alcohol etílico absoluto 3%
-(NH4)2SO4 0.1 % -(NH4)2SO4 0.1%
-KH2PO4 0.05 % -KH2PO4 0.05%-Extracto de levadura 0.2% - Extracto de levadura 0.2%
-pH 7 -pH 7

METODOLOGIA

Tomar dos vasos de precipitados de 250 mL. Y preparar 200 ml del medio 1 y del medio 2.
Medir con el potenciómetro el pH tanto del medio 1 como del medio 2 y ajustar a pH7
Tomar 6 tubos de rosca de 50 ml perfectamente limpios y llenarlos con el medio 1.
Se toman 6 tubos de ensaye de 2 ml perfectamente...