CIDO C TRICO
Páginas: 2 (391 palabras)
Publicado: 9 de septiembre de 2015
ÁCIDO CÍTRICO
El ácido cítrico se transforma en oxaloacetato mediante una reacción catalizada por la citrato-liasa (CL) citrato oxalato + acetato.
En presencia de malato-deshidrogenasa (MDH) y delactato deshidrogenasa (LDH), el oxalacetato y su derivado de descarboxilación, el piruvato se reduce en L-malato y L-lactato por la nicotinamida -adenina -dinucleótida reducida (NADH). Oxaloacetato +NADH+H+L-malato+NDA+Piruvato+NADH+H+L-la…
La cantidad de NADH oxidada a NAD+ en estas reacciones es proporcional al citrato presente. La oxidación de la NADH se mide mediante la disminución de suabsorbancia a una longitud de onda de 340 nm2.
Reactivos
1. Tampón pH=7.8
2. Solución de nicotinamida-adenin-dinucleótido -reducida (NADH).
3. Solución de malato-deshidrogenasa lactato (MDH/LDH).
4.Citrato liasa (CL).
5. Polivinil polipinolidona (PVPP).
Material
- Espectofotómetro con medidas de 340nm de absorción de NADH.
- Cubetas de vidrio de 1 cm de trayecto óptico.
- Micropipetas para tomarvolúmenes entre 0.02 ml y 2 ml.
Preparación de la muestra
- La determinación de citrato se efectúa directamente sobre el vino sin decoloración ni dilución, cuando el contenido de ácido cítrico seamenor a 400 mg/l.
- El vino tinto se recomienda tratarlo antes con PVPP, se pone en suspensión al agua alrededor de 0.2g de PVPP y se deja 15 minutos en reposo. Se filtra sobre filtro de pliegues.
- Seañade una cantidad de vino de 10ml a un erlenmeyer, el PVPP húmedo se extrae con una espátula de vidrio. Se agita durante 3 minutos y se filtra de nuevo.
Proceso
Se ajusta la cantidad de onda a 340nm y se realizan las medidas de absorbancia en cubetas de 1 cm. La absorbancia de debe ajustar con respecto al aire. Se coge una cantidad de 1 ml de testigo muestra solución. Se mezcla transcurridosunos 5 minutos, se espera a que finalice la reacción y se leen las absorbancias de la muestra DA = DAM.DAT.
Método de cálculo.
El contenido de ácido cítrico se expresa en (mg/l) miligramos litro....
El ácido cítrico se transforma en oxaloacetato mediante una reacción catalizada por la citrato-liasa (CL) citrato oxalato + acetato.
En presencia de malato-deshidrogenasa (MDH) y delactato deshidrogenasa (LDH), el oxalacetato y su derivado de descarboxilación, el piruvato se reduce en L-malato y L-lactato por la nicotinamida -adenina -dinucleótida reducida (NADH). Oxaloacetato +NADH+H+L-malato+NDA+Piruvato+NADH+H+L-la…
La cantidad de NADH oxidada a NAD+ en estas reacciones es proporcional al citrato presente. La oxidación de la NADH se mide mediante la disminución de suabsorbancia a una longitud de onda de 340 nm2.
Reactivos
1. Tampón pH=7.8
2. Solución de nicotinamida-adenin-dinucleótido -reducida (NADH).
3. Solución de malato-deshidrogenasa lactato (MDH/LDH).
4.Citrato liasa (CL).
5. Polivinil polipinolidona (PVPP).
Material
- Espectofotómetro con medidas de 340nm de absorción de NADH.
- Cubetas de vidrio de 1 cm de trayecto óptico.
- Micropipetas para tomarvolúmenes entre 0.02 ml y 2 ml.
Preparación de la muestra
- La determinación de citrato se efectúa directamente sobre el vino sin decoloración ni dilución, cuando el contenido de ácido cítrico seamenor a 400 mg/l.
- El vino tinto se recomienda tratarlo antes con PVPP, se pone en suspensión al agua alrededor de 0.2g de PVPP y se deja 15 minutos en reposo. Se filtra sobre filtro de pliegues.
- Seañade una cantidad de vino de 10ml a un erlenmeyer, el PVPP húmedo se extrae con una espátula de vidrio. Se agita durante 3 minutos y se filtra de nuevo.
Proceso
Se ajusta la cantidad de onda a 340nm y se realizan las medidas de absorbancia en cubetas de 1 cm. La absorbancia de debe ajustar con respecto al aire. Se coge una cantidad de 1 ml de testigo muestra solución. Se mezcla transcurridosunos 5 minutos, se espera a que finalice la reacción y se leen las absorbancias de la muestra DA = DAM.DAT.
Método de cálculo.
El contenido de ácido cítrico se expresa en (mg/l) miligramos litro....
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