ciencia

Universidad de San Carlos de Guatemala Día de laboratorio: jueves
Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia
Escuela de Química Biológica
Departamento de Bioquímica
Informe de Resultados de Laboratorio (Hidrolisis del Almidón por Amilasa)
Bioquímica II, 2012 (01 de agosto)
Objetivos
Conocer el efecto de laamilasa sobre el almidón.
Determinar la cantidad de azucares reductores liberados.
Desarrollar la metodología para la determinación de azúcares reductores.
Procedimiento
Se realizo una mezcla de almidón al 1% con amilasa diluida, de esta mezcla se tomaron 5 alícuotas de 1mL a los tiempos 0, 5, 10, 20 y 30, las alícuotas fueron tratadas con calor durante 2 minutos. El número de sitios reductoresliberados fue determinado empleando el método desarrollado por Folin y modificado por Somogyi y Nelson. Para el cálculo respectivo se preparo una curva de calibración con una solución patrón de 10 mg/100mL de glucosa. Se transfirieron los volúmenes (las alícuotas) a tubos de Folin; aforando con agua destilada homogenizando adecuadamente las soluciones, se leyó en espectrofotómetro a 630 nm paraobtener los moles de enlace α (1,4) rotos por la enzima en cada tiempo.


Resultados
Tabla No. 1
Sitios reductores Liberados en la Hidrolisis del Almidón por Amilasa
Tiempo (min)
Absorbancia a 630 nm*
Sitios Reductores detectados
/(concentración de glucosa) M*
Sitios Reductores
Liberados en el periodo M*
0
0.067
7.80 x 10 -6
0.00
5
0.080
2.64 x 10 -5
1.86 x 10 -5
10
0.745
9.77 x10 -4
9.50 x 10 -4
20
O.882
1.17 x 10 -3
1.95 x 10 -4
30
1.324
1.80 x 10 -3
6.32 x 10 -4
*M (molaridad expresada en moles/litro) nm (nanómetros)
Fuente: Fuente: Datos experimentales obtenidos en el laboratorio de Bioquímica, edificio T-12, USAC

Interpretación (discusión) de Resultados
La práctica de laboratorio consistió en determinar el efecto de la hidrolisis de la α-amilasaproducida por Aspergillus Oryzae, sobre el almidón. Es decir que se determinó la cantidad de azucares reductores liberados por la acción de la amilasa, la cual se realizo por el método de Folin, modificado por Somogyi y Nelson. (Voit, 2004)
Para poder caracterizar y diferenciar los sitios reductores se utilizaron pruebas de laboratorio que se basan en las propiedades químicas del almidón y de laamilasa (López, 2004). Para ello se agregó amilasa a una solución de almidón. “Las amilasas son enzimas que degradan el almidón, estas hidrolizan al almidón en α-maltosa, la enzima actúa primero sobre los extremos no reductores” (Christensen, 1980), conforme pasaba el tiempo la amilasa degradaba el almidón, para detener dicha hidrolisis se calentó la solución, ya que el calor desnaturaliza laamilasa.
Se tomaron alícuotas cada 5 minutos desde el tiempo 0 hasta 30 minutos, ya que ha medida que pasaba el tiempo la amilasa actuó hidrolizando mas sitios del almidón, y con ello se obtuvo mas sitios reductores liberados, la disminución de color observado en cada uno de los tubos de almidón con amilasa (ver imagen No, 1 y 2 en anexos), indica la formación de monómeros a partir de polímeros en estecaso del almidón, esto se observo luego del calentamiento de las soluciones en distintos tiempos.

Para determinar la concentración de sitios reductores sobre todo maltosa liberados por la amilasa, se colocó reactivo de Somogyi, (sulfato cúprico). El reactivo de Somogyi, al actuar con los sitios reductores, reduce el ion cúprico a ion cuproso, cu2+ a Cu2O↓ al ser sometido nuevamente al calor...