Ciencias

Capítulo 26
Introducción a los Métodos
Cromatográficos

Clasificación de los métodos cromatográficos en columna

Cromatografía de Gases (GC)
fase móvil: Gas
Cromatografía de Líquidos (HPLC)
fase móvil: Líquido
Cromatografía de Fluido Supercrítico (SFC)
fase móvil: Fluido Supercrítico
Electroforesis Capilar (CE)
fase móvil: Ninguna o Líquida

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Equilibrios Químicos empleados porTécnica

Cromatografía de Gases (GC)
Adsorción
Partición

Cromatografía de Líquidos (HPLC)
Adsorción
Partición
Intercambio Iónico
Exclusión Molecular
Afinidad

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Definiciones y Términos comúnmente empleados en los
métodos cromatográficos
1. Tiempo de retención (tR) - Tiempo (en segundos usualmente) que la muestra
pasa en la columna. Es medido a partir del punto deinyección a el momento en
que aparece la altura máxima del pico. Es característico para cada analito en la
determinada fase móvil/fase estacionaria.

2. Tiempo muerto (tM o to) - También conocido por tiempo cero ó tiempo de
retención del disolvente. Representa el tiempo requerido para que eluya un
compuesto no retenido por la columna. Puede ser empleado para medir el
volumen o espacio dentro deuna columna.

3. Tiempo de retención relativo (t’R) - También conocido como tiempo de
retención ajustado. Representa el tiempo que el soluto pasa “absorbido” dentro
del empaque de la columna. Se calcula restando al tiempo de retención (tR) el
tiempo muerto (tM).

t’R = tR - tM

Definiciones y Términos comúnmente empleados en los
métodos cromatográficos
4. Ancho de base (Wb) - Es laporción de la línea base intersectada por
tangentes dibujadas en el pico. Es igual a 4s de un pico tipo Gauss y es
necesaria para calcular los platos teóricos y la resolución. (W 1/2) es el ancho
del pico a la mitad de la altura del pico, generalmente es más usada que W b
para calcular el numero de platos teóricos por ser más representativa del pico.

5. Velocidad lineal de la fase móvil (µ o u) -Se emplea en la elaboración de
gráficas para efectuar estudios de eficiencia en columnas. Se gráfica
generalmente H vs m para obtener gráficas conocidas como: gráficas de van
Deemter.

µ = Lc / tM = Largo de la columna (cm) / Tiempo muerto (sec)

6. Número de platos teóricos (N) - Es la longitud de columna requerida para que se
establezca un equilibrio del soluto entre las fases móvil yestacionaria. El número de
platos teóricos mide que tan buena es una columna, la cual debe tener un número
grande de platos teóricos y producir picos angostos. Algunas formas empleadas
para incrementar los platos teóricos incluye: Alargar la columna, disminuir el
diámetro de la columna, mejorar el empaque, disminuir la cantidad de muestra y
optimizar el flujo de fase móvil. La definición deplato teórico (y altura de plato) a
permanecido desde la teoría propuesta por Martin y Syle, postulada para tratar de
explicar eficiencias en las separaciones cromatográficas; Según esta teoría la
columna se encuentra formada por un número N de capas angostas y sucesivas
llamadas “platos” dentro de los cuales se efectuaban equilibrios del analito entre las
fases móvil y estacionaria.
tR, W b yW 1/2 se colocan en
las mismas unidades (tiempo
N = 16 (tR/Wb)2 = 5.54 (tR/w1/2)2
o distancia)
7. Altura de un plato teórico (HETP ó H) - Representa el largo de columna requerida
por un plato teórico. Según Syle y Martin: representa la longitud de las capas
continuas (platos) que componen una columna. H es empleada como medida de la
eficiencia de una columna. Cuando el valor es pequeñorepresenta una eficiencia
mayor. H es empleada además como parámetro para determinar el ensanchamiento
de una banda.

H = Lc / N

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8. Coeficiente de partición (K) - Es el valor de la constante de equilibrio formado
por el analito entre las fases móvil y estacionaria. Es constante para una
temperatura y característica para cada relación de analito-fase móvil-fase
estacionaria.
Conc....