Ciencias

Páginas: 2 (473 palabras) Publicado: 28 de noviembre de 2012
INSTITUTO TECNOLOGICO DEL VALLE DEL YAQUI
INTRODUCCIÓN A LA BIOTECNOLOGIA
“Extracción, amplificación y visualización de ADN mediante la técnica de PCR anidado”

Introducción
Técnica que nospermite amplificar selectivamente un segmento específico de DNA, hasta obtener una cantidad suficiente para su posterior manipulación, regularmente esta técnica es utilizada en la detección de patógenosu enfermedades de importancia alrededor del mundo, así, como la detección de enfermedades genéticas y muchas otras en las cuales la implementación de esta técnica ha logrado avances considerables.METODOLOGIA

I.- Extracción de ADN
1.- Recepción y etiquetado de muestra
2.- Preparación del material a utilizar en el proceso de extracción.
3.- Colocar 500 µl de buffer de Lysis en un tubode 1.5 ml.
4.- Pesar 40 mg de tejido (pleopodo o branquia).
5.- Colocar el tejido dentro del tubo que contiene buffer de lysis y macerar con un pistilo estéril.
6.- Incubar la muestra en undigestor a 95 °C por 10 minutos.
7.- Centrifugar a 12,000 rpm por 10 minutos.
8.- Transferir 200 µl del sobrenadante a un tubo limpio con 400 µl de alcohol al 95% agitar en vortex y centrifugar a 12,000rpm por 5 minutos.
9.- Decantar el sobrenadante y dejar secar el pellet
10.- Resuspender en 200 µl de agua libre de nucleasas o DEPC.
11.- Almacenar a -20 °C hasta su uso.

II.- Cuantificacióndel ADN
1.- Cargar el software del equipo Nanodrop 2000 y hacer la identificación de la muestra.
2.- Colocar una muestra que consiste de agua DEPC el cual es cargado como “blanco”.
3.- Cargar 1µl de la muestra problema y realizar la lectura.
4.- Guardar los datos obtenidos en cuanto a concentración y las relaciones 260/280 y 260/230.

III Amplificación del ADN
1.- Preparación de la mezclade reacción para el primer paso de amplificación.
2.- Colocar 8 µl de la mezcla de la primera reacción en cada tubo de 0.2 ml
3.- Adicionar 2 µl de la muestra.
4.- Cargar el protocolo de...
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