Ciencias

“Año De La Integración Nacional Y El Reconocimiento De Nuestra Diversidad”

ESCUELA ACADÉMICO-PROFESIONAL DE
INGENIERÍA AMBIENTAL

Curso:
MICROBIOLOGÍA - INFORME DE LABORATORIO

Docente:

Integrante:
* MOSTACCERO QUIROZ, YAHAIRA
* RELICARIO FIGUEROA, CRISTOPHER

Aula: 161-C Turno: tarde
Ciclo: III
Año:2012


PRÁCTICA DE LABORATORIO NUMERO 4
TÉCNICAS DE COLORACIÓN DIFERENCIAL

Objetivo: aplicar y distinguir algunas técnicas de coloración diferencial de bacterias.
Introducción: algunas de las técnicas de coloración diferencial más importantes son la de GRAM y técnicas especiales para diferenciar flagelos, capsulas y esporas que son las que estudiaremos enesta práctica
Los colorantes se combinan con el protoplasma bacteriano; si la célula no ha muerto; el proceso mismo de la coloración; es bastante severo y puede producir artefactos.
La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombreal bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color moradas y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella.
Procedimiento:
* Recogermuestras.
* Hacer el extendido en espiral.
* Dejar secar a temperatura ambiente.
* Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado 3 veces aprox.)
* Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar 1 min. Todas las células gram positivas y gram negativas se tiñen de color azul-purpura.
* Enjuagar con agua.
* Agregar lugol y esperar entre1 minuto.
* Enjuagar con agua.
* Agregar acetona y/o alcohol y esperar hasta 8 a 15 segundos aproximadamente(parte critica de la coloración)
* Enjuagar con agua.
* Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar 45 segundos. Este tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.

El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas lascélulas bacterianas (tanto Gram positivas como Gram negativas) a través de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales están presente para solubilizar el yodo, y actúan de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. El I2 entra en las células yforma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos sí lo hacen.
Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste.Habitualmente es un colorante de color rojo, como lasafranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen azules.
La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la técnica. Sirve para hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas. Al término del protocolo, las Grampositivas se verán azul-violáceas y las Gram negativas, se verán rosas (si no se hizo la tinción de contraste) o rojas (si se usó, por ejemplo, safranina).
Esta importante coloración diferencial fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884. En este método de tinción, la extensión bacteriana se cubre con solución de uno de los colorantes de violeta de metilo, que se deja actuar durante...