ciencie

Reactivos[editar]

Tubos de PCR que albergan la mezcla en un volumen total de 100 μL.
Para realizar la técnica se necesitan:2

Los 4 desoxirribonucleótidos-trifosfato (dNTP), sustratos parapolimerizar nuevo ADN.
Dos cebadores o iniciadores (en inglés, primers), oligonucleótidos que son, cada uno, complementarios a una de las dos hebras del ADN. Son secuencias cortas, de entre seis ycuarenta nucleótidos, normalmente de dieciocho a veintidós, que permiten que la polimerasa inicie la reacción. Deben estar enfrentados y a no mucha distancia. Delimitan la zona de ADN a amplificar, esdecir, corresponden a los nucleótidos que definen los extremos de la secuencia que se desea replicar.
Iones divalentes. Se suele usar magnesio (Mg2+), agregado comúnmente como cloruro de magnesio (MgCl2),o algún otro catión divalente. También se puede emplear manganeso (Mn2+), para mutagénesis de ADN mediante PCR, ya que altas concentraciones de Mn2+ incrementan la tasa de error durante la síntesisde ADN. Actúan como cofactores de la polimerasa.
Iones monovalentes, como el potasio.
Una solución tampón o buffer que mantiene el pH adecuado para el funcionamiento de la ADN polimerasa.
ADNpolimerasa o mezcla de distintas polimerasas con temperatura óptima alrededor de 70 °C (la más común es la polimerasa Taq).
ADN molde, que contiene la región de ADN que se va a amplificar.
Termociclador,el aparato que mantiene la temperatura necesaria en cada una de las etapas que conforman un ciclo.
Conceptos de la PCR[editar]
Sensibilidad: se refiere a la cantidad mínima de ADN necesaria para quese produzca la amplificación, es decir, para obtener una banda. Se relaciona con los falsos negativos, ya que puede que una muestra sea positivas pero sea dada como negativa porque no se haamplificado por no tener suficiente cantidad de ADN.
Especificidad: se refiere a la obtención de un solo producto amplificado. Viene determinada por los oligos y la especificidad con la que se unen al ADN...