Cinetica enzimatica

Trabajo Práctico: Cinética Enzimática

Objetivos:
- Determinación del período de tiempo durante el cual la velocidad de hidrólisis del fenilfosfato permanece constante (TML).
- Cálculo de la velocidad inicial de la reacción en presencia de una determinada concentración de enzima y de sustrato.
- Cálculo del % de sustrato consumido en el tiempo de linealidad máxima.
-Determinación de la velocidad inicial de hidrólisis del fenilfosfato por la fosfatasa alcalina en función de la concentración de sustrato como una cinética hiperbólica
- Cálculo de la Vmáx, Kcat y Km de la fosfata alcalina con el fenilfosfato.

Materias y métodos: Ver guía de TP Cinética enzimática páginas 3 y 4 (primera parte), 6 y 7 (segunda parte).

PRIMERA PARTE

Resultados:

Tabla 1. Aobtenidas y μmol fosfato calculados a partir de la ecuación de calibración.

|Tubo |A (a 710 nm) |Pi (μmol) |Uso del tubo |Tiempo de incubación |
|1 | 0.004 |0 | |- |
| | || | |
| | | |Calibración | |
|2 |0.106 |0.1 | |- |
|3 |0.162 |0.2| |- |
|4 |0.227 |0.3 | |- |
|5 |0.308 |0.4 | |- |
|6 |0.420 |0.5| |- |
|7 |0.011 |0 |Control de buffer |0 |
|8 |0.043 |0.04 |Control de enzima |0 |
|9 |-0.011 |0|Control de sustrato |0 |
|10 |-0.001 |0 |Control HNE |30 |
|11 |0.372 |0.49 | |30 |
| | || | |
| | | | | |
| | | |Hidrólisis enzimática | |
|12 |0.344 |0.45| |25 |
|13 |0.328 |0.43 | |20 |
|14 |0.255 |0.33 | |15 |
|15 |0.204 |0.26| |10 |
|16 |0.165 |0.21 | |6 |
|17 |0.080 |0.09 | |3 |
|18 |-0.002 |0...