Cinetica microbiana

IPN

Carrera: Ing. Biotecnológica.

Fecha de entrega: 06 De Abril Del 2010.
Objetivo
Realizar la curva de crecimiento de Escherichia coli, identificar sus fases, mediante la técnica de conteo en placa.
Introducción
El crecimiento de un microorganismo se define, como el aumento de sus componentes celulares, que puede tener como resultado un incremento de su tamaño o del número de supoblación, o de ambos. El crecimiento de un microorganismo se ve influenciado por diversos factores, entre los que se encuentran: temperatura, pH, concentración de oxígeno, presión atmosférica, procedencia y características del inoculo, composición del medio de cultivo, etc. Sin embargo, un gran número de microorganismos y, en particular las bacterias, han conseguido adaptarse y desarrollarse encondiciones extremas, que destruirían a la mayoría de los microorganismos superiores. (Madigan Michael, 2003).

Existen varias técnicas para cuantificar el crecimiento microbiano. En estas técnicas, se puede medir tanto la masa como el número de células de la población. Los métodos de cuantificación se clasifican en:
1.- Métodos directos: Son aquellos en los que se cuenta el número total de célulasen un volumen conocido y así se estima el número total en la población. 1
* Recuento al microscopio. Se utilizan cámaras de Petroff-Hausser o de Neubauer.1
* Contadores electrónicos.
* Recuento en placa. La muestra se coloca sobre la superficie de la placa con agar, se extiende y posteriormente se incuba.1
* Sistemas de filtración con membrana. 1
2.- Métodos Indirectos: Sonaquellos que utilizan parámetros distintos del número de células, pero que pueden relacionarse de forma directa con este. Los parámetros que se utilizan son, masa celular, actividad metabólica, etc. 1 Los métodos indirectos más utilizados son:
* Determinación de peso seco y húmedo. Se mide la masa total del microorganismo, presente en un cultivo.1
* Turbidimetria. Se basa en la capacidad de lascélulas para absorber y/o dispersar la luz que incide sobre ellas.1

Con la cuantificación de microorganismos a través del tiempo es posible, la representación grafica del crecimiento microbiano. La curva normal de crecimiento presenta varias fases:
1.-Fase de latencia. Periodo de adaptación de un microorganismo, a las nuevas condiciones del medio de incubación al que ha sido transferido. Lafase de latencia, varía dependiendo del medio de cultivo, condiciones del inoculo, edad del inoculo, etc. (Keiko, 2005)
2.-Fase exponencial. Aumento constante de la población a intervalos regulares de tiempo. (Keiko, 2005).
3.-Fase estacionaria. Cese del crecimiento por agotamiento de nutrientes y por acumulación de productos tóxicos. No hay incremento neto del número de células, debido a queel número de células que se generan es igual al número de células que mueren. (Ramirez Santos Jesus, 2005).
4.-Fase de muerte. Se define como la perdida irreversible de la capacidad de reproducción. (Keiko, 2005).
Método
Primera Sesión

Desecar durante 2 h.
Meter al horno a 70º c durante 24 h.
Colocar a peso constante
Hacer 9 charolas y rotular
Preparar tubos Eppendorf
Esterilizarpuntas de micropipeta
Introducir tubos y tomar lecturas.
Prender espectro y ajustar longitud de onda
Preparar puntas para micropipeta
Realizar curva tipo
Preparar tubos Eppendorf
Esterilizar agua para diluciones
Preparar microtubos Eppendorf
Hacer una varilla para extensión
Esterilizar puntas para micropipeta.
Preparar 9 cajas petri y rotular
Preparar y esterilizar material

HACERMÉTODO CORRESPONDIENTE

PESO SECO
ESPECTOFOTOMETRÍA
EXTENSIÓN EN PLACA

Llenar 6 tubos

Pesar y desecar durante 30 minutos hacer esto hasta lograr peso cte.

Realizar grafica

Cada 90 minutos tomar muestra y rotular de acuerdo al tiempo. Esterilizar y entregar material.
Método
Hacer cálculos y comparar resultados.
Segunda Sesión
Realizar graficas.
Tomar 20 mililitros de inoculo y...