Cinética enzimática

CINÉTICA ENZIMÁTICA 
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3​
Palacios P.​
 (1426316); Perlaza A.​
(1427584); Vargas N (1427418)​
; 
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4  ​
Vargas M (1422542)​
Universidad del Valle, Facultad de Ciencias 

Naturales y Exactas, Departamento de Biología. 
papnpoe@gmail.com​
;​
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​
alejo.perlazag@gmail.com​
; 

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3​

albaluciacaciedo3140@gmail.com 
 

Resumen  
 
Se  determinaron  características  cinéticas  de  la fosfatasa  alcalina  extraída  del  intestino 
delgado  del  cerdo,  a  través   del  modelo  de  Michaelis­  Menten  y  mediante  el  uso  de  la 
espectrofotometría  para   determinar  las  absorbancias  y  concentraciones  del  producto  (p­ 
NFPl)  a  situaciones  variables  como  concentración  de  la  enzima  o  sustrato  (p­NFP),  pH  y temperatura. Esto se realizó para entender cómo afectan las alteraciones en las condiciones 
de  reacción  a  la  afinidad  de  la enzima  por el sustrato y la cantidad de producto formado. Se  
obtuvo  una  Vmax  de  136, 986 µmol/mL * min   y   un  Km  de  434, 67 µmol/mL   concluyendo que 
la  concentración  de  la  enzima  es  directamente proporcionales a la  velocidad de la reacción, 
y  al  aumentar  la  concentración  de  sustrato  se  tiende  a  llegar  a un  límite,  es  decir,  a  una 
velocidad  máxima;  la  temperatura  y  el  pH  de  reacción  óptima  para la fosfatasa alcalina son 
entre 20­40°C y 9.5 respectivamente. 
 
Introducción  
 
Las  enzimas  son  proteínas  específicas  que  se  encargan  de  acelerar  la  velocidad  de  una 
reacción  al  involucrar  estadios  intermedios  de  menor   energía,  es  decir,  disminuyen  la 
energía de  activación  (Curtis,  2008).  La  cinética  enzimática  es  el  campo  de  la  bioquímica 
encargada de estudiar las reacciones catalizadas por enzimas, específicamente la velocidad  
en  la  que  ocurren  y  los  factores  que   influyen  en  ella  ​
(Murray,  R.,  et  al.  2013),  puesto  que 
cada  enzima  presenta  unas  condiciones  óptimas  en  las que tiene su mayor rendimiento​. La 
enzima  evaluada  fue  la   fosfatasa  alcalina,  que  transforma  el  p­nitrofenilfosfato  en 
p­nitrofenol, y fue extraída del intestino de cerdo.  
La  fosfatasa  alcalina  (FA)  es  una  proteína  encontrada  en  los  tejidos  corporales. Los tejidos 
con  cantidades   más  elevadas  de  FA  son   el  hígado,  las  vías  biliares  y  los  huesos 
(Wachsmuth,  E.  &  Hiwada,  K.,  1973). Teóricamente  esta  presenta  una  alta  afinidad  con  el 
p­nitrofenilfosfato  (Guija,  E,.  et  al.  2007),  por  lo  que en la  presente práctica se confirmará al 
calcular  la  constante  de  Michaelis­Menten  (Km)  que al presentar un valor bajo indicaría una 
a  la  afinidad,  además  de  calcular  la  velocidad  máxima   de  reacción  donde  la  enzima  se 
encuentra  saturada  ​
(Murray,  R., et  al.  2013)​
.  Asimismo  se  busca  observar  como  cambia  la 

actividad  enzimática  ante  diferente  factores,  como  el cambio en la concentración de enzima 

y  de  sustrato,  el  cambio  en  el  pH  con  el  fin  de  determinar  el  pH  óptimo  para  la  fosfatasa 
alcalina,  y  la   temperatura   a  la  cual  la  proteína  alcanza  su  mayor  actividad  o  aquella  en  la que es disfuncional. 
 
Metodología 
 
La  práctica se realizó con base a la guía de laboratorio de bioquímica  I de la Universidad del 
Valle.  Los  procedimientos  1  y  2  de  la  guía   fueron  realizados  por  todos  los  grupos.  Los 
procedimientos  3,4,5  y  6  fueron  repartidos  en  cada  grupo.  Sin  embargo  en  el  siguiente informe realiza el análisis de todos los datos obtenidos en todos los grupos.  
 
Las concentraciones de p­NF o p­NFP se hallaron con la siguiente ecuación: 
 
 

   Cinicial  *  V inicial =  Cf inal  *  V f inal  

Ecuación 1 

 

Por otra parte el cálculo de las velocidades de catálisis se halló con la siguiente ecuación:  
 
V =

μmoles p−NF formado
mL  enzima * 10 minutos

                        Ecuación 2 

 
Resultados 
 
Punto 2. ​...