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DETECCIÓN DE RNA EN POR ELECTROFORESIS EN GELES DE AGAROSA®
Carrera:QFB


OBJETIVOS
Determinar la calidad del RNA aislado anteriormente
MATERIALES YREACTIVOS
Buffer TAE 10X: 4.84g de Tris Base; 1.14mL de ácido acético glacial (17.4M); 0.37g de EDTA disódico. Se lleva a 100mL con agua miliQ.
Buffer de carga para RNA:Para 1mL: 720L de formamida, 360L de glicerol; azul de bromofenol.
Agarosa
Cámara de electroforesis horizontal
Fuente de poder
Lámpara UV
Bromuro de etidio o SybrGreen

procedimiento
1. Preparar un gel al 2% de agarosa en buffer TAE 1X libre de RNAsas. Para un volumen de 50 mI pesar 1g de agarosa, agregar 50mL de TAE 1X en unmatraz Erlenmeyer libre de RNAsas.
2. Calentar en el microondas cuidando que no ebulla rápidamente y se tire del matraz.
3. Enfriar la solución y agregar 2.7L debromuro de etidio, mezclar suavemente evitando la
formación de burbujas y vaciar a la placa de la cámara de electroforesis. Colocar los peines.
4. Esperar a lasolidificación del gel.
5. Preparación de la muestra: Colocar 7 µL de RNA en un tubo Eppendorf y añadir 3 µL de búffer de carga para RNA. Calentar a 56°C por 10 min ycolocar en el hielo.
6. Retirar los peines de la cámar de electroforesis y colocar buffer TAE 1X en la cámara de electroforesis. El nivel del buffer debe de cubrirligeramente el gel.
7. Cargar las muestras en los pozos del gel de agarosa.
8. Correr el gel a 80-100V
9. Observar el gel en lámpara UV y detectar las bandas de RNA.BIBLIOGRAFIA
• Ausbel F., Brent R., Kingston R.E., Moore D., Seidman J., Smith J.A., Struhl, K. 1995. Current Protocols in Molecular Biology. John Wiley & Sons, Inc.