Citometria

Dpto. Bioquímica y Biología Molecular I
Universidad Complutense de Madrid

CITÓMICA

Es la ciencia de análisis celular que integra los conocimientos de
la genómica y la proteómica con la función dinámica de los sistemas
celulares complejos, es decir de los citomas.

Tiene como objetivo definir exhaustivamente el fenotipo molecular
aparente de una célula, que resulta de la interacciónentre el genotipo
del individuo y la exposición a factores externos e internos.

El desarrollo de la citómica se ha hecho posible gracias a las
nuevas y potentes tecnologías de análisis basado en la célula
individual, especialmente la citometría de flujo y la microscopía
confocal.

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CITOMETRÍA DE FLUJO

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Citometría de flujo: permite la determinación de múltiples parámetros en
células individuales dentro de poblaciones heterogéneas
Aplicaciones:

No fluorescentes:
CD8-negativas
Fluorescentes:

CD8-positivas

R-PE Alexa Fluor 700 (anti-CD8)

Número de células

Número de células

Análisis del fenotipo:
- Empleode anticuerpos marcados fluorescentemente, proteínas marcadas
con GFP o sondas fluorescentes
- Antígenos de superficie
- Antígenos intracelulares (hace falta permeabilización de la membrana)
- Sondas intracelulares (ROS, radicales libres, potencial de membrana
mitocondrial)
No fluorescentes: Fluorescentes:
CD8CD8negativas
positivas

R-PE (anti-CD4)

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Citometría de flujo: permite la determinación de múltiples parámetros en
células individuales dentro de poblaciones heterogéneas
Aplicaciones:
Análisis del contenido en DNA (ploidía):
- Empleo de fluoróforos intercalantes del DNA (PI, Hoechst 33342, Dapi)
- Estudios de ciclo celular y dotación cromosómica
- Apoptosis (degradación del DNA;hipodiploidía)

Haploidía (n) o
hipodiploidía

Número de células

2n
G0+G1

S

4n
G2+M

Fluorescencia

INTERCALANTES MÁS UTILIZADOS
Yoduro de propidio: láser azul, requiere
permeabilización y tratamiento con
RNasa (intercalante de DNA y RNA).
Hoechst 33342: láser UV, permeable y
selectivo por DNA (AT).
Dapi: láser UV, permeable pero muy
tóxico (no para ciclo celular), no influyeestado de condensación de cromatina y
es selectivo para DNA (AT).

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Citometría de flujo: permite la determinación de múltiples parámetros en
células individuales dentro de poblaciones heterogéneas
Aplicaciones:

Neutrófilos

Número de células

Dispersión lateral (complejidad)

Recuento, caracterización yposible selección celular (cell sorting):
- Clasificación en función del tamaño y/o la complejidad intracelular
- Clasificación en función de la expresión de determinados antígenos
- Identificación de células viables, ápoptóticas o necróticas

Monocitos

Dispersión frontal (tamaño)
Linfocitos

Dispersión lateral (complejidad)

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Fitoplancton 2 µm

Glóbulo rojo 6 µm

Bacterias 0,5 µm
Linfocito 8 µm

Neutrófilo 12 µm

Blastocisto 100 µm

Monocito 14 µm

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Electrónica y
software

Sistemas
fluídicos
Óptica

FL4 – IR*
(>700 nm)
FL3 (>600 nm)
FL2 (585/42 nm)
FL1 (530/30 nm)

Láseres
Azul (Ar): 488 nm (*)
Rojo(He·Ne): 633 nm
Violeta (diodo): 405 nm
Near UV: 375 nm
Amarillo-verde: 561 nm

Fotodiodos
(FSC y SSC)

Fotomultiplicadores

Detectores

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SISTEMA DE LÁSERES DEL EQUIPO FACSAria III DE BECTON DICKINSON

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