citometris

ESTANDARIZACIÓN DE UN PROTOCOLO DE CITOMETRÍA DE FLUJO PARA
DETERMINAR SIMULTÁNEAMENTE LOS RECUENTOS ABSOLUTOS DE
LTCD4+ LTCD8+, LT REGULADORES, LB Y CÉLULAS NK EN SANGRE
PERIFÉRICA CON EL FIN DE EVALUAR LOS RECUENTOS EN PACIENTES
CON SÍNDROME DE DOWN

ANDRÉS CAMILO VÁSQUEZ FLÓREZ

TRABAJO DE GRADO
BACTERIOLOGÍA

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DEBACTERIOLOGÍA
BOGOTA D.C. 2009

 
 

NOTA DE ADVERTENCIA

Articulo 23, Resolución Nº 13 de Julio de 1946

“La universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus alumnos en sus
trabajos de tesis. Solo velará porque no se publique nada contrario al dogma y a la moral
católica y por que las tesis no contengan ataques personales contra persona alguna, antes
bien se veael anhelo de buscar la verdad y la justicia”.

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ESTANDARIZACIÓN DE UN PROTOCOLO DE CITOMETRÍA DE FUJO PARA
DETERMINAR SIMULTÁNEAMENTE LOS RECUENTOS ABSOLUTOS DE LTCD4+
LTCD8+, LT REGULADORES, LB Y CÉLULAS NK EN SANGRE PERIFÉRICA CON EL
FIN DE EVALUAR LOS RECUENTOS EN PACIENTES CON SÍNDROME DE DOWN

ANDRÉS CAMILO VÁSQUEZ FLÓREZ

_________________________
Marta Mesa MScPONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE BACTERIOLOGÍA
BOGOTÁ D.C. 2009
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ESTANDARIZACIÓN DE UN PROTOCOLO DE CITOMETRÍA DE FUJO PARA
DETERMINAR SIMULTÁNEAMENTE LOS RECUENTOS ABSOLUTOS DE LTCD4+
LTCD8+, L TREGULADORES, LB Y CÉLULAS NK EN SANGRE PERIFÉRICA CON EL
FIN DE EVALUAR LOS RECUENTOS EN PACIENTES CON SÍNDROME DE DOWN

ANDRÉS CAMILO VÁSQUEZ FLÓREZ_______________________
Jurado

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE BACTERIOLOGIA
BOGOTÁ D.C. 2009

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ESTANDARIZACIÓN DE UN PROTOCOLO DE CITOMETRÍA DE FUJO PARA
DETERMINAR SIMULTÁNEAMENTE LOS RECUENTOS ABSOLUTOS DE LTCD4+
LTCD8+, L TREGULADORES, LB Y CÉLULAS NK EN SANGRE PERIFÉRICA CON EL
FIN DE EVALUAR LOS RECUENTOS EN PACIENTES CON SÍNDROME DEDOWN

ANDRÉS CAMILO VÁSQUEZ FLÓREZ

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INGRID SCHULLER, PhD

LUZ AMPARO MALDONADO, MEd

Decana Académica

Directora

Facultad de Ciencias

Carrera de Bacteriología

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE BACTERIOLOGIA
BOGOTÁ D.C. 2009
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Resumen
Objetivo. Estandarizar un protocolo decitometría de flujo en una plataforma para determinar
simultáneamente números absolutos de LT CD4+ LT CD8+ LT reguladores, LB y células NK
en sangre periférica.
Materiales y métodos. Se recolectaron muestras de sangre periférica con heparina de
adultos sanos para 1) titular los Acs monoclonales seleccionados (anti-CD45 APC-H7, antiCD19 PECy7, anti-CD16 FITC, anti-CD56 FITC, anti-CD3 Pacificblue, anti-CD4 PercP
Cy5.5, anti-CD25 APC, anti-CD127 PE); 2) utilizar el colorante de viabilidad SYTOX Blue, 3)
ensayar protocolos de lisado-lavado (LW) y lisado no lavado (LNW); y, 4) establecer un
protocolo de compensación. En el control de calidad se tuvieron en cuenta la verificación
diaria del funcionamiento del equipo con perlas CS&T y el control de la alineación de los
laser conperlas multicolor Rainbow.
Resultados. Se diseñó un protocolo de citometría de flujo multiparamétrica para
determinación simultánea en un solo tubo de LTCD4+, LTCD8+, LB, células NK y LTreg en
muestras de sangre periférica con Acs monoclonales anti-CD45APC-H7, anti-CD3 Pacific
Blue, anti-CD4 PerCPCy5.5, anti-CD19PECy7, anti-CD16FITC, antiCD56FITC, anti-CD25
APC y anti-CD127PE en un sistema delisado y lavado y sin colorante de viabilidad.

 
 
 

Tabla de contenido
1.

Introducción ......................................................................................................................... 4

2.

Justificación ......................................................................................................................... 5

3.

Marco teórico...