Citopatologia De Los Derrames Asciticos

Método Hettich

Preparaciones en portaobjetos para la citología de derrames pleurales o ascitis

Preparaciones en portaobjetos para la citología de derrames pleurales o ascitis

El derrame pleural y la ascitis contienen, además de células del epitelio celómico, linfocitos y granulocitos eosinófilos y neutrófilos. El contenido en proteínas a menudo es de unos 30 g/l. El contenido celularcon frecuencia varía mucho. En ambos líquidos se puede encontrar sangre y en la ascitis es posible encontrar grasa en suspensión.

Ventajas del método Hettich
1. Cámaras citológicas apropiadas para diferentes contenidos celulares y volúmenes 2. Alto rendimiento celular 3. Buena representación celular 4. Densidad de ocupación óptima

· El sobrenadante se extrae con una pipeta y se conserva. · Elsedimento se mezcla con el tampón de lisis (1 parte volumétrica del sedimento con 10 partes volumétricas de tampón). · Mezclar bien y dejar reposar durante 10 minutos a temperatura ambiental. La hemoglobina liberada hace que el líquido adquiera una tinción roja transparente. · La reacción se interrumpirá añadiendo 10 veces la cantidad de solución fisiológica de cloruro de sodio (0,9% NaCl) o unasolución de NaCl tamponada con fosfato. · Centrifugar durante 10 minutos a 350 x g. · Eliminar el sobrenadante con los eritrocitos lisados por decantación y desecharlo. · Introducir el sedimento en 10 ml de solución fisiológica de NaCl 0,9 % (o PBS - phosphate buffered saline), mezclar bien y volver a centrifugar durante 10 minutos a 350 x g. · Eliminar el sobrenadante y añadir el sedimento alsobrenadante original de la muestra, mezclándolos bien. Ahora podrá elaborarse una preparación citológica a partir del material de muestra. Importante: las células no deben dejarse durante demasiado tiempo en el tampón para lisis, ya que sino también se disolverían.

Preparación 1. Preparación de muestras con alta proporción de eritrocitos
Como una proporción alta de eritrocitos tiene efectosnegativos sobre la calidad de la preparación, se recomienda eliminarlos antes de la elaboración de una preparación citológica utilizando un tampón para lisis. a) Preparación del tampón para lisis 8,29 g de cloruro de amonio (NH4Cl) 1,0 g de bicarbonato potásico (KHCO3) 0,037 g de ácido etilenodiamintetraacético (EDTA) se mezclan con agua destilada hasta obtener un volumen de 1 litro. Para mejorar laconservación se recomienda autoclavar el tampón de lisis.

2. Selección de los accesorios adecuados
Para la centrifugación de un derrame pleural y de la ascitis recomendamos la cámara de 2 ml (nº ref. 1664), con una superficie de sedimentación de 60 mm2 y la cámara de 4 ml (nº ref. 1665) con una superficie de sedimentación de 120 mm2. La cámara de 2 ml es apropiada para muestras de hasta unmáximo de 100.000 células, la cámara de 4 ml para muestras más ricas en células hasta un máximo de 200.000 células.

3. Montaje del adaptador citológico
El montaje de los accesorios citológicos puede consultarse en nuestro diagrama “El giro perfecto para la preparación – el ZYTO-System de HETTICH”. En preparaciones para portaobjetos a partir de derrames pleurales y ascitis por regla general senecesita una fijación en seco. Por ello deberá montar el adaptador citológico con papel filtro (véase el punto B1 del diagrama). En muestras infecciosas recomendamos que coloque la tapa nº 1661 (véase el punto B2 del diagrama).

b) Lisis de los eritrocitos · La muestra se centrifuga durante 10 minutos a 350 x g (esto corresponde a 1.700 min-1 en el rotor de 6 posiciones y a 1.900 min-1 en el rotor de4 posiciones.

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Preparaciones en portaobjetos para la citología de derrames pleurales o ascitis

4. Centrifugación
a) Sedimentación Introduzca las muestras y centrifúguelas durante 10 minutos a 490 x g (esto corresponde a 2.000 min-1 en el rotor de 6 posiciones y a 2.200 min-1 en el rotor de 4 posiciones. b) Eliminación del sobrenadante exento de células El sobrenadante exento de...