Clase 2

Clase 2
Técnicas Histológicas
Microscopia

Métodos Histológicos
• Pasos necesarios para obtener las muestras
aptas para su observación.
-Células y tejidos vivos.
- Material muerto o inanimado.
• Microscopía óptica
• Microscopía electrónica

Preparación del tejido para MO
1) Obtención del tejido:
- Biopsia.
- Necrocirugía.
- Raspado (Citología exfoliativa).
La muestra debe procesarse lo antesposible
para evitar la degeneración que ocurre luego
de la extracción.

2) Fijación:
Objetivo: Conservar la morfología del tejido.
- frena en el metabolismo celular.
- Estabilidad de las proteínas
formación de enlaces
cruzados (endurecimiento).
- Inactivación de enzimas que inician la autodigestión.
(degeneración post- mortem).
- Eliminar microorganismos patógenos.
Puede ser
5%

Química:Formalina, Formol 10%, Formaldehído
Física: Congelación. Aplicación de calor.

* Fijación por inmersión: se sumerge el tejido en la solución
fijadora.
* Fijación por perfusión: se inyecta el fijador en el torrente
sanguíneo ( Experimentación).

3) Preparación de la muestra para inclusión:
• Lavado y deshidratación: eliminar el agua del
tejido. Se pasa sucesivamente por soluciones de
alcohol conconcentraciones crecientes.

• Aclaramiento: Elimina el alcohol del tejido. Se
usan solventes orgánicos: Xileno- Tolueno.
En esta etapa hay riesgo de que se produzcan
artefactos por desgarros y retracciones del
tejido.

4) Inclusión:
Se coloca el tejido en parafina liquida.
- Disuelve los solventes orgánicos.
- Ingresa al tejido.
- Cuando se enfría, se endurece y forma el taco.

Técnica de congelación•
•
•
•
•

Se usa para biopsias intraoperatorias.
Rápida
Menor variación estructural
Conserva la actividad enzimática
Se congela un trozo de tejido en nitrógeno
líquido, anhídrido carbónico o se sumerge en
un liquido frió (- 50ºC).
• Se corta en un criostato a bajas temperaturas.
• Se seca por evaporación.

5) Corte:
• Se realiza con un micrótomo
• Corta al tejido con un espesor de 3 -10µm.
• Loscortes se montan sobre un porta objetos
de vidrio.

6) Preparación para coloración:
• Extracción de la parafina del tejido con xileno
o tolueno.
• Rehidratación del tejido, mediante
soluciones de alcohol con concentración
decreciente.

7) Tinción:
• Capacidad que tiene los colorantes, de teñir de
manera selectiva los componentes tisulares.
• Los de uso mas frecuente son hematoxilina y
eosina.
•Montaje en un medio no acuoso (Bálsamo de
Canadá).
• Se cubre con un cubreobjetos.

Artificios
• Estructuras del preparado que no existen en el tejido
vivo, aparecen durante el proceso de preparación.
Retracciones

Precipitados

Fijación inadecuada

Plegamientos

Normal

Cuchillas defectuosas

Preparación del tejido para ME
1)Fijación:
• Glutaraldehído: fija las proteínas.
• Tetraóxido deosmio: interacciona con los
lípidos.
• Debido al gran poder de resolución, la calidad
de la fijación (grado de preservación de la
estructura subcelular) debe ser la mejor
posible.

2) Preparación de los tejidos para la
inclusión: Ídem MO
3) Inclusión: Se realiza con resinas epoxi que al
secarse le dan gran dureza, y permiten cortes
ultra finos.
4) Corte: 20-100 nm. Se usan cuchillas de
diamante ovidrio
5) Coloración: Se usan iones de metales
pesados, que imparten densidad electrónica.
Se busca aumentar el contraste.

Tinción
• Eosina:
-Tiñe de color rosa/rojo.
- Coloración Ácida.
- Carga negativa (anión).
- Reacciona con los componentes catiónicos de
las células y tejidos. “Acidofilia”
- Los componentes de los tejidos que reaccionan
con los colorantes ácidos se denominan
acidófilos.Tinción
• Hematoxilina :
- Tiñe de color azul/violeta.
- Colorante básico
- Tiene carga positiva (catión).
- Reacciona con los componentes aniónicos de
la célula y los tejidos. “Basofilia”.
- Los componentes de la célula que se colorean
con hematoxilina se denominan basófilos.

Características tintoriales de las
estructuras celulares y extracelulares
Basofilia
- Nucléolos
- Heterocromatina
-...