CLONACION biologia

Clonación de DNA en Escherichia coli

Para replicar el DNA clonado se pueden utilizar distintos tipos de célula huésped. Uno de los huéspedes más utilizados es la cepa de laboratorio K12 de E.coli.Ésta y otras cepas de E.coli se utilizan como huésped ya que están bien caracterizadas genéticamente
Para crear moléculas de DNA recombinante se precisan varios pasos. Si se utiliza un plásmido comovector, el procedimiento es el siguiente:

1. El DNA que se va a clonar se aísla y se trata con una enzima de restricción para crear fragmentos que acaben en secuencias específicas.
2. Estosfragmentos se ligan a moléculas de plásmido obteniéndose un vector recombinante.
3. El vector recombinante se transfiere a células huésped bacterianas,
4. La célula huésped se hace crecer en una placa decultivo, donde formará colonias. Puesto que las células de cada una de las colonias provienen de una sola célula inicial, todas las células de la colonia, y los plásmidos son genéticamente idénticas, oclones.
Clonación en huéspedes eucarióticos

Hemos descrito la utilización de E.coli como huésped para la clonación. También pueden utilizarse otras especies de bacterias como huéspedes, comoB.subtilis y Streptomyces. Estos sistemas huésped bacterianos y sus vectores son parecidos a los descritos para E.coli Se han desarrollado varios sistemas de clonación utilizando huéspedes eucarióticos.Vectores de levadura.
Aunque la levadura es un organismo eucariótico, puede manipularse y crecer de manera parecida a las células bacterianas.
En levadura hay un plásmido de origen natural, denominado“plásmido 2 micras” que se ha utilizado para construir varios vectores de clonación para levadura. Combinando secuencias de plásmidos bacterianos con secuencias del
plásmido 2 micras, se puedenproducir vectores con muchas propiedades útiles.

Cromosomas artificiales de levadura.
Un segundo tipo de vector de levadura es el cromosoma artificial de levadura (YAC, del inglés “yeast artificial...