Clonacion de genomas

Clonación de genomas bacterianos en levadura.
La mayoría de los microbios no han sido cultivados, y muchos de los que son cultivables son difíciles, peligrosos o caros para propagar o songenéticamente intratables. La clonación de rutina de las grandes fracciones del genoma o genomas enteros de estos organismos mejoraría significativamente su descubrimiento y caracterización genética yfuncional.
La clonación del ADN es una técnica que define la biología molecular moderna. En general, el ADN clonado contiene no más de unos pocos genes. Recientemente, ha habido un interés en la clonación delos segmentos más grandes del DNA, incluyendo genomas enteros.
La clonación de los genomas de M. genitalium y M. mycoides de levadura sugiere que la clonación del genoma completo podría ser valiosapara la ingeniería de organismos genéticamente intratables. La clonación, permitiría la introducción de una modificación del genoma de la levadura en su entorno celular original. La clonación delgenoma entero también facilita el estudio de los genomas de organismos que son difíciles de cultivar. Además, ayuda en la construcción y propagación de genomas sintéticos.
Construcción de vectorespmycYACTn
El vector de pmycYACTn kb-10 fue construido a partir de seis fragmentos con nuestro in vitro con diez nanogramos de plásmido que se utilizó como molde en PCR con ADN polimerasa y el tampón HF(NEB), salvo que el cloruro de magnesio extra (MgCl) se ha añadido para una concentración final de 2 o 3 milímetros. Las condiciones fueron las siguientes: 98 ° C durante 30 s, seguido por 30 ciclos de98 ° C durante 10 s, 46 a 59 ° C (ciclos 1-5) o de 51 a 64 ° C (60 a 30 ciclos) por 30 s y 72 ° C durante 90 s, seguido de 72 ° C durante 5 min.
Construcción de vectores miniTn-Puro-JCVI-1.7
Unfragmento de 9616 pb se separó de la serie BAC PCC1 por digestión con NotI. Usando nuestro método de recombinación, este fragmento se combinó con amplicones 5 y para hacer la cepa E. coli , se...