Clonacion Y Exploracion De La Secuencia De La Serie

CLONACION Y EXPLORACION DE LA SECUENCIA DE LA SERIE
LABORATORIO DE GENETICA

Tabla de contenidos

Actividad Diagrama de flujo

Introducción y ajuste del curso

Objetivos específicos que cumple este proyecto

Cronograma para el curso de laboratorio

Laboratorio de la Sesión 1

Laboratorio de la Sesión 2


Laboratorio de la Sesión 3

Laboratorio Sesión 6

Laboratoriode la Sesión 7

Laboratorio de Sesión 8

INFORMACIÓN GENERAL
Bio-Rad Laboratories dará a conocer la clonación y secuenciación de la serie Explorer en el otoño 2008. La intención de esta guía de planeación es proporcionar una visión general a la totalidad de los estudiantes del proyecto de investigación, incluyendo detalles de los plazos, los materiales incluidos, y equipo requeridos paraque los instructores puedan preparar su plan de estudios y estimación presupuestaria requeridos con antelación. Estas son estimaciones basadas en información actualmente disponible, y pueden cambiar en la versión final de la serie de laboratorio.
La clonación y secuenciación de la serie Explorer está integrado por ocho módulos de laboratorio que pueden utilizarse por separado o en serie para unproyecto semana entera 6-8. Debido a la naturaleza modular de la serie, algunos componentes se utilizan en combinación con otros módulos para un flujo de trabajo continuo.

Resumen
Las técnicas de clonación de genes son un tema común en la mayoría de los cursos de biología molecular, pero ofrecer a los estudiantes la experiencia práctica es lo más difícil. El objetivo de este proyecto es lograrcon estudiantes aislar, secuenciar y caracterizar un gen fundamental de la glucólisis (GAPDH, el gen de la gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa o GAPDH) de una especie vegetal, o de la variedad, con gen del cual no se haya publicado previamente su secuencia. Además de las técnicas de laboratorio húmedo (por ejemplo, extracción de ADN, reacción en cadena de la polimerasa (PCR), la ligadura, latransformación, restricción de la digestión), los estudiantes obtienen experiencia en el análisis bioinformático de sus clones únicos. Esto incluye búsquedas BLAST, la identificación de los intrones o exones, la construcción contig, y el conocimiento bioinformático de diferentes bases de datos. Estos resultados son publicables en la base de datos NCBI GenBank. Curso de Introducción y ajuste
Eneste proyecto los estudiantes aislar (clon) una porción principal del gen GAPDH. Este gen es considerado como un gen de mantenimiento debido a que codifica una enzima que cataliza en un importante paso de la glicólisis, que es la etapa de respiración que se produce en todas las células eucariotas.
Por lo tanto, este gen está altamente conservado y se encuentra en el genoma de todas las plantas.GAPDH es una enzima crucial para todos los animales, protistas, hongos, bacterias y plantas. Por lo tanto, hay muchas oportunidades para establecer conexiones entre los aspectos moleculares de GAPDH y sus importancia biomédica y evolutiva. En efecto, en Arabidopsis hay siete genes muy similares GAPDH. Esta práctica de laboratorio se dirige a una subfamilia de estos genes - GAPC y GAPC2 – y losestudiantes podrán clonar uno o ambos de estos genes en el curso de su experimento. La estrategia básica de esta serie de laboratorio consiste en extraer el ADN genómico y sintetizar grandes cantidades del ADN que representa una porción del gen GAPDH. Esto se hará mediante PCR en el ADN dela planta que se desea estudiar. Entonces veremos como ligar este ADN a un vector de clonación y células de E. colitransformada con la molécula recombinante resultante. Las células supervivientes que contiene este ADN recombinante se proyectarán, se evaluarán y se multiplicaran para que las grandes cantidades de ADN recombinante puedan ser aislado y secuenciado en última instancia. El proceso de secuencia, por lo general realizado por un laboratorio de la universidad o comercial, revelará la secuencia...