Clonacion

CLONACIÓN Y EXPRESIÓN GENÉTICA EN PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS



INTRODUCCIÓN

Es un hecho conocido que la clonación existe de modo natural, consustancial a una de las formas de perpetuación de las especies, tanto del reino vegetal como del animal. La importancia actual es la intervención del hombre en este proceso asexuado de reproducción.

Sin duda que desde el conocimiento y manipulacióndel genoma humano, se han venido descubriendo nuevos avances científicos en la intervención de la genética humana.

La clonación es “el proceso de copiado idéntico de un organismo, una célula o de una molécula, en forma asexuada”.

La investigación ha pasado etapas de desarrollo por diferentes caminos, como son la clonación de moléculas para hacer proteínas de uso industrial, hasta laclonación de células madres de organismos humanos con objetivos terapéuticos.

Todo ello, junto al desafío mayor que está constituido por la clonación de un “homo sapiens” completo; ello tiene implicancias éticas, tanto para el individuo, como para la sociedad.











1. CLONACIÓN

La clonación (derivado del griego κλων, que significa "retoño") puede definirse como el proceso por elque se consiguen copias idénticas de un organismo ya desarrollado, de forma asexual. Estas dos características son importantes:

- Se parte de un animal ya desarrollado, porque la clonación responde a un interés por obtener copias de un determinado animal que nos interesa, y sólo cuando es adulto conocemos sus características.

- Por otro lado, se trata de hacerlo de forma asexual. Lareproducción sexual no nos permite obtener copias idénticas, ya que este tipo de reproducción por su misma naturaleza genera diversidad.

Tipos de clonación

1. Clonación molecular
La clonación molecular se refiere al proceso de aislar una secuencia de ADN de interés, insertarlo en un plásmido y obtener múltiples copias de ella en un organismo (generalmente procariota) por acción de la DNApolimerasa. La clonación se emplea frecuentemente para amplificar fragmentos de ADN que contienen genes, un paso esencial en el análisis subsecuente. Frecuentemente, el término clonación es erróneamente utilizado para referirse a la identificación de una localización cromosómica de un gen asociado con un fenotipo particular de interés, como en la clonación posicional. En la práctica, la localizaciónde un gen en un cromosoma o región genómica no necesariamente habilita para aislar o amplificar la secuencia genómica de interés.

La clonación de cualquier secuencia de ADN incluye los siguientes pasos:

❖ Fragmentación: Inicialmente, el ADN de interés necesita ser fragmentado para proveer un segmento relevante de ADN de un buen tamaño. La preparación de los fragmentos para la clonación seobtiene frecuentemente del PCR, pero también puede hacerse por medio de la digestión con enzimas de restricción y a veces fraccionando con electroforesis en gel.
❖ Ligación: Un procedimiento de ligación se emplea cuando el fragmento amplificado se inserta en un vector. Dicho vector (que generalmente es circular) se convierte en una secuencia lineal utilizando enzimas de restricción, y esincubado con el fragmento de interés bajo las condiciones apropiadas con una enzima llamada ADN ligasa.
❖ Transfección: Después de la ligación, el vector con el gen de interés se transfecta a una célula. Comúnmente se utiliza la electroporación, aunque existe un gran número de técnicas alternativas.
❖ Selección: Las células transfectadas se cultivan. Como este procedimiento actualmente se considerade baja eficiencia, se deben identificar las colonias de células que han sido exitosamente transfectadas con el vector que contiene el gen deseado.

2. Clonación celular
Clonar una célula significa derivar una población celular a partir de una sola célula. Ese es un importante procedimiento in vitro cuando se desea la expansión de una sola célula con ciertas características. Una...