Clonación De Adn
Páginas: 2 (489 palabras)
Publicado: 6 de diciembre de 2012
La clonación de ADNc en vectores bacteriófagos.
A pesar de vectores del plásmido se han utilizado ampliamente en los protocolos de clonación de ADNc, hay situaciones en las que puede no serapropiado. Si un gran número de recombinantes se requiere, como es el caso de un ARN de baja abundancia iba a ser clonados, los vectores de fago puede ser más adecuado. La principal ventaja aquí es que elembalaje in vitro puede ser utilizado para generarlos fagos recombinantes, lo que aumenta considerablemente la eficiencia del proceso de clonación. Además, es mucho más fácil de almacenar y manejar ungran número de clones de fagos que en el caso de las colonias bacterianas que llevan plásmidos. Dado que el aislamiento de un clon de ADNc de una especie rara de ARNm puede requerir cientos demiles de selección de clones independientes, la facilidad de manejo se convierte en una consideración importante.
Fig. 6.6
Homopolímero de relaves. (A) El vector se corta con PstI, lo que generasobresalgan 3'-OH terminales. (B) El vector es entonces atado con residuos de dG con transferasa terminal. El inserto de ADN es atado con residuos de dC de un modo similar. (C) Las colas dC y dG soncomplementarios y por lo tanto, la inserción puede ser recocido con el vector para generar un recombinante. Los sitios PstI se regeneran en los extremos del ADN de inserción, como se muestra.
La clonación deADNc en vectores de fagos λ es, en principio, no es diferente a la clonación de cualquier otra pieza de ADN. Sin embargo, el vector debe ser elegido con cuidado, como la clonación de cDNA tienerequisitos ligeramente diferente a la clonación de ADN genómico en vectores λ. Por lo general ADNc será mucho más corto que los fragmentos de ADN genómico, por lo que un vector de inserción suele serelegido. Vectores tales como λgt10 y 16A Caronte son adecuados, con una capacidad de clonación de unos 7,6y 9,0 kb, respectivamente.
El ADNc puede ser fraccionado antes de la clonación, para eliminar...
A pesar de vectores del plásmido se han utilizado ampliamente en los protocolos de clonación de ADNc, hay situaciones en las que puede no serapropiado. Si un gran número de recombinantes se requiere, como es el caso de un ARN de baja abundancia iba a ser clonados, los vectores de fago puede ser más adecuado. La principal ventaja aquí es que elembalaje in vitro puede ser utilizado para generarlos fagos recombinantes, lo que aumenta considerablemente la eficiencia del proceso de clonación. Además, es mucho más fácil de almacenar y manejar ungran número de clones de fagos que en el caso de las colonias bacterianas que llevan plásmidos. Dado que el aislamiento de un clon de ADNc de una especie rara de ARNm puede requerir cientos demiles de selección de clones independientes, la facilidad de manejo se convierte en una consideración importante.
Fig. 6.6
Homopolímero de relaves. (A) El vector se corta con PstI, lo que generasobresalgan 3'-OH terminales. (B) El vector es entonces atado con residuos de dG con transferasa terminal. El inserto de ADN es atado con residuos de dC de un modo similar. (C) Las colas dC y dG soncomplementarios y por lo tanto, la inserción puede ser recocido con el vector para generar un recombinante. Los sitios PstI se regeneran en los extremos del ADN de inserción, como se muestra.
La clonación deADNc en vectores de fagos λ es, en principio, no es diferente a la clonación de cualquier otra pieza de ADN. Sin embargo, el vector debe ser elegido con cuidado, como la clonación de cDNA tienerequisitos ligeramente diferente a la clonación de ADN genómico en vectores λ. Por lo general ADNc será mucho más corto que los fragmentos de ADN genómico, por lo que un vector de inserción suele serelegido. Vectores tales como λgt10 y 16A Caronte son adecuados, con una capacidad de clonación de unos 7,6y 9,0 kb, respectivamente.
El ADNc puede ser fraccionado antes de la clonación, para eliminar...
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