Cltivo in vitro de anteras

Iturralde Gabriela, Salinas María
Escuela Politécnica del Ejército, Carrera de Ingeniería en Biotecnología, Departamento de Ciencias de la Vida, Cultivo de Tejidos Vegetales.
RESUMEN
El polen que se encuentra en las anteras, en estado en de microspora, es un gran precursor para el desarrollo de organogénesis indirecta. Esta característica de las anteras conocida se una en el cultivo invitro, mediante los granos de polen en condiciones adecuadas especificas en un medio de MS enriquecido con 2,4 D que generara una nuevas plantas, por diferenciacin de tejido.
El cultivo de anteras principalmente sirve para obtener plantas con la mitad de numero de cromosomas normal de la especie a la que pertenece, las plantas haploides serán clones con características iguales al de la planta madreque fue seleccionada para la práctica.
De esta forma se puede obtener líneas homocigóticas de plantas sin tener que pasar por la endogamia normal.
En la práctica se uso botones de cucarda mediante un método de desinfección, siembra e incubación.

INTRODUCCIÓN
Las células gametofíticas conocidas como microsporas o megasporas que son las células sexuales de la planta, se pueden usar comoexplante en el cultivo de tejidos para obtener una planta haploide. (Roca et al, 1982)
Las esporas deben pasar por una etapa llamada via esporofitica que tiene como fin conseguir esporofitos haploides, y dejar el curso normal que pasa en condiciones de campo esta etapa se la conoce curso ontogénico. (Roca et al, 1982)
El proceso se llama androgénesis cuando las microsporas originan embriones yplantas, y ginegénesis cuando tiene lugar en el cultivo de óvulos y ovarios. La androgénesis, obtenida mediante el cultivo de anteras, es la técnica más usada para la inducción de haploides y ha demostrado tener gran importancia para el fitomejoramiento. (Roca et al, 1982).
La técnica del cultivo de anteras y las anteras inmaduras que contienen polen en una etapa específica de desarrollo secolocan en medios donde el polen inmaduro se divide para formar embriones o callo. Transferidos éstos a medios de regeneración, se forman plantas. En la mayoría de los casos se producen plantas haploides estériles, pero en algunas especies ocurre una duplicación espontánea de los cromosomas en las etapas de desarrollo de callo y de regeneración de la planta. (Roca et al, 1982)
Esta técnica de cultivode anteras tiene como fin a acelerar la obtención de líneas mejoradas. Dicho proceso de transformación celular a partir de granos de polen en un brote y consecuentemente, su inducción en embriogénesis es la mejor vía a nivel de laboratorio e industrial por la factibilidad de tiempo y recursos para lograr líneas completamente homocigóticas (Lentini, et al, 2005).

La Cucarda es un arbustoperennifolio de la familia de las y Malváceas y es originaria de Asia oriental. En esta práctica, se busca el desarrollo de un embrión mediante el paso de una fase de callo a partir de polen de botones cerrados de cucarda y con condiciones nutritivas del medio y las condiciones físicas del laboratorio.
MATERIALES Y MÉTODOS

Desinfección de área de trabajo e instrumentos:
El piso del cuarto desiembra se limpio con Kalipto. Luego se encendieron las cámaras de flujo laminar y se activó la luz UV, dejando por 10 minutos. Los instrumentos colocados previamente en la cámara de flujo laminar se los flameó en el mesón con savlon al 90%. El papel estéril utilizado se lo colocó en la estufa durante 1 hora a 50ºC aproximadamente, para su posterior uso en el cultivo de anteras. Todos los instrumentosa ser usados durante el cultivo (mechero, pinzas, bisturí, papel estéril, etc.), fueron rociados con el alcohol al 90% antes de ser ingresados a la cámara de flujo laminar.
Desinfección del explante:
Se realizó un lavado de los botones florales con agua destilada y detergente (5 gr. aproximadamente), a una agitación manual constante. Luego se le colocó en cloro al 5% con unas gotas de tween...