colesterol y trigliceridos

Practica# 10 Colesterol
Objetivo:
Cuantificar el colesterol por el método enzimático.
Fundamento:
Los lípidos son sustancias orgánicas insolubles en agua, pero solubles en solventes orgánicos. Losprincipales lípidos de plasma humano son el colesterol, los triglicéridos, los fosfolípidos y los ácidos grasos no esterificados (AGNE). Los lípidos son trasportados en el plasma y otroscompartimientos temporales en forma de lipoproteínas, que son complejos macromoleculares compuestos de un núcleo hidrofobito, un fosfolípidos hidrofilito y una proteína de superficie.
El colesterol es un alcoholesteroideo insaturado. Constituye un componente estructural importante en las membranas de las células y un precursor en la biosíntesis de los ácidos biliares y las hormonas eseroideas. Dos terciosdel colesterol plasmático están esterificados, en tanto que el tercio restante está libre. Del 60-70% va vehiculado por lipoproteínas de baja densidad (LDL), DEL 20-35% por proteínas de alta densidad(HDL) y del 5-12% por lipoproteínas de muy baja densidad.
El colesterol se determinara después de hidrolisis enzimática y oxidación. El indicador quinoneimina se forma a partir de peróxido de hidrógenoy aminoantipirina en presencia de fenol y peroxidasa.
Principio del método:
Ester de Colesterol + H2O Colesterol esterasa Colesterol + Acidos Grasos
Colesterol + O2 Colesterol oxidasa Colester-3-ONA+ H2O
H2O2 + Fenol + 4-amino-antipirina Peroxidasa Quinoneimina + H2O
Material:
Material de punción(adaptador, agujas, torunda, torniquete)
Tubos de ensaye
Pipeta automática
Microlab centrifugaBaño maría o estufa bacteriológica

Reactivos:
Reactivo 1 = 4-Amino-antipirina, Fenol, Peroxidasa, Colesterol esterasa y Colesterol oxidasa.
Estándar

Técnica:
1. Encender el aparato 10 minutosantes.
2. Realizar punción venosa y preparar suero, separando los componentes celulares.
3. Incubar y posteriormente centrifugar
4. Seleccionar la prueba a realizar
5. Colocar un tubo 1000µl de agua...