colesterol

Medición del colesterol sérico
(Bowman y Wolf, 1962)
Fundamentos
se precipitan las proteínas del suero y se extraen simultáneamente el colesterol con alcohol etílico absoluto. Después de separar las proteínas por centrifugación, se hace reaccionar el extracto alcohólico con iones férricos, en una solución no acuosa muy acida, lo que da un color violeta rojizo (reacción de Zak modificada). Laabsorción del color obtenido con el extracto de suero se comprara en el espectrómetro, a 550m con una solución alcohólica patrón de colesterol sometido al mismo tratamiento.
Método
1. Con una pipeta de Lang-Levy de 50 microlitros (0.050ml) se pone 0.050ml del suero o plasma en el fondo de un tubo de centrifuga con tapón de vidrio (de 7 o 12 ml). Con una pipeta volumétrica de 5 ml, se añadeesta cantidad de alcohol etílico absoluto directamente al suelo en el fondo del tubo. El precipitado de proteínas que se forma debe ser lo más fino posible. Se tapa el tubo, se agita violentamente durante 10 segundos, y se centrífuga 2 500 rpm durante 10 minutos.
2. Se preparan tres matraces de Erlenmeyer de 25ml, con tapón, que se rotulan problema, blanco y patrón. En el matraz problema se pipeteanexactamente 3ml de sobrante del tubo de centrifuga correspondiente. (El sobrenadante puede decantarse en un tubo de ensayo limpio, para pipetear con más facilidad) En el matraz blanco se ponen 3ml de la solución patrón diluida de colesterol, que se saco previamente del refrigerador para que su temperatura se equilibre con la del laboratorio.
3. A los tres matraces se le añade 2ml del reactivocoloreado diluido. Conviene utilizar una pipeta automática de punta fina, y proceder lentamente, de manera que el reactivo forme una capa de bajo del extracto alcohólico. Inmediatamente después de añadir el reactivo coloreado al matraz, se imprime a este un movimiento giratorio, evitando las proyecciones, durante 115 segundos. Es fundamental que los matraces se agiten de la misma manera y por elmismo tiempo. Los matraces tapados se dejan enfriar 30 minutos, en este lapso terminan de aparecer el color.
4. Las absorbencias del problema y el patrón se leen a 550m en el espectrómetro, establecida la absorbencia cero con el banco. Puesto que el reactivo coloreado es corrosivo, es preferible utilizar una cubeta de flujo continuo, o pasar los contenidos de los matraces a tubos de ensayo de buenacalidad que se utilizan como cubetas.
Cálculos
x 200 = mg de colesterol por 100 ml de suero
Valores normales. El nivel de colesterol sérico depende de tantos valores de cualquier cifra “normal” resulta discutible. Incluso en un mismo individuo, se observan variación de un día a otro y de una hora a otra en el mismo día. En estas circunstancias las cifras que siguen solo pueden construir unaguía general.
Recién nacido: de 45 a 100mg/100ml
Entre un mes y 20 años: de 110 a 250mg/100ml
40 años: hombres, 135 a 315 mg/100ml
mujer, 135 a 290mg/ 100ml
50 años: hombres, 150 a 340mg/100ml50 años: hombres, 140 a 321mg/100ml
mujer, 156 a 356mg/ 100ml
Reactivos
solución concentrada de cloruro férrico, se disuelven 2.5 g de FeCl3.6H2O puro, o 1.5g de FeCl3 en 100ml de acido ortofosforico puro de 87 por 100. Se conserva por tiempo indefinido en un vaso de plástico en el refrigerador.
Reactivo coloreado diluido. Se diluyen 8volúmenes de solución concentrada de cloruro férrico hasta 100 volúmenes con H2SO4 concentrado, grado reactivo. Si se conserva en el refrigerador, son un sistema de subministro acuático, este reactivo puede concentrarse de 3 a 8 semanas. Es preferible preparar una cantidad suficiente para cubrir este periodo aproximadamente, en función del volumen del trabajo del laboratorio.
Patrón concentrado...