Colesterol

CHOLESTEROL

Colesterol
CHOD-POD. Enzimático colorimétrico
Determinación cuantitativa de colesterol IVD
Conservar a 2-8ºC
PRINCIPIO DEL METODO El colesterol presente en la muestra origina un compuesto coloreado según la reacción siguiente: Ésteres colesterol + H2O ⎯⎯ ⎯→ Colesterol + Ácidos grasos ⎯ Colesterol + O2 ⎯⎯⎯⎯→ 4-Colestenona + H2O2 2 H2O2 +Fenol + 4-Aminofenazona ⎯⎯ ⎯ → Quinonimina+ 4H2O ⎯ La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de colesterol presente en la muestra ensayada1,2. SIGNIFICADO CLINICO El colesterol es una sustancia grasa presente en todas las células del organismo. El hígado produce naturalmente todo el colesterol que necesita para formar las membranas celulares y producir ciertas hormonas. La determinación del colesterol es uno delas herramientas más importantes para el diagnostico y clasificación de las lipemias. El aumento del nivel de colesterol es uno de los principales factores de riesgo cardiovascular5,6. El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
POD CHOD CHE

4. 5.

Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC ó 10 min. a temperatura ambiente. Leer la absorbancia(A) del Patrón y la muestra, frente al Blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 60 minutos.

CALCULOS ( A ) Muestra x 200 (Conc. Patrón) = mg/dL de colesterol en la muestra ( A ) Patrón Factor de conversión: mg/dL x 0,0258= mmol/L. CONTROL DE CALIDAD Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados: SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210). Si losvalores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el instrumento, los reactivos y el calibrador. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias. VALORES DE REFERENCIA 5,6 Evaluación del riesgo : Menos de 200 mg/dL Normal 200-239 mg/dL Moderado 240 o más Alto Estos valores sonorientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia. CARACTERISTICAS DEL METODO Rango de medida: Desde el limite de detección de 0,6 mg/dL hasta el limite de linealidad de 600 mg/dL. Si la concentración es superior al limite de linealidad, diluir la muestra 1/2 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2. Precisión:

REACTIVOS R1 PIPES pH 6,990 mmol/L Tampón Fenol 26 mmol/L Colesterol esterasa (CHE) 300 U/L R2 Colesterol oxidasa (CHOD) 300 U/L Enzimas Peroxidasa (POD) 1250 U/L 4 - Aminofenazona (4-AF) 0,4 mmol/L Patrón primario acuoso de Colesterol 200 CHOLESTEROL CAL mg/dL PREPARACION Reactivo de trabajo (RT): Disolver ( → ) el contenido de un vial de R 2 Enzimas en 1 frasco de R 1 Tampón. Tapar y mezclar suavemente hasta disolversu contenido. Estabilidad (RT): 4 meses en nevera (2-8ºC) o 40 días 15-25ºC. Mantener protegido de la luz CONSERVACION Y ESTABILIDAD Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. CHOLESTEROL CAL Unavez abierto, es estable 1 mes si se mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. Indicadores de deterioro de los reactivos: - Presencia de partículas y turbidez. - Absorbancia (A) del Blanco a 505 nm ≥ 0,1. MATERIAL ADICIONAL - Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 505 nm (500-550). - Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. - Equipamiento habitualde laboratorio. MUESTRAS 1,2 Suero o plasma : Estabilidad de la muestra 7 días a 2-8ºC y varios meses si se mantiene la muestra congelada (-20ºC). PROCEDIMIENTO 1. Condiciones del ensayo: Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . 505 nm (500-550) Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37ºC...