Coliformes Totales, Practica 3

TERCERA PRÁCTICA
NMP DE COLIFORMES TOTALES

1. Definición
El grupo de bacterias coliformes totales comprende todos los bacilos Gramnegativos aerobios o anaerobios facultativos, no esporulados,que fermentan la lactosa con producción de gas en un lapso máximo de 48 h. a 35°C ± 1ºC. Este grupo esta conformado por 4 géneros principalmente: Enterobacter, Escherichia,Citrobacter y Klebsiella.El grupo de coliformes fecales, está constituido por bacterias Gram-negativas capaces de fermentar la lactosa con producción de gas a las 48 h. de incubación a 44.5 ± 0.1°C. Este grupo no incluye unaespecie determinada, sin embargo la más prominente es Escherichia coli.
La demostración y el recuento de organismos coliformes, puede realizarse mediante el empleo de medios de cultivo líquidos ysólidos con características selectivas y diferenciales.
La determinación de microorganismos coliformes totales por el método del Número más Probable (NMP), se fundamenta en la capacidad de este grupomicrobiano de fermentar la lactosa con producción de ácido y gas al incubarlos a 35°C ± 1°C durante 48 h., utilizando un medio de cultivo que contenga sales biliares. Esta determinación consta de dosfases, la fase presuntiva y la fase confirmativa.
En la fase presuntiva el medio de cultivo que se utiliza es el caldo verde bilis brillante, el cual permite la recuperación de los microorganismosdañados que se encuentren presentes en la muestra que crezcan en presencia de sales biliares. Durante la fase confirmativa se emplea como medio de cultivo EMB el cual es selectivo y solo permite eldesarrollo de aquellos microorganismos capaces de fermentar la lactosa. La determinación del número más probable de microorganismos coliformes fecales se realiza a partir de los tubos positivos de la pruebapresuntiva. La búsqueda de Escherichia coli se realiza a partir de los tubos positivos de caldo bilis verde brillante, los cuales se siembran por agotamiento en medios selectivos y diferenciales...