coliformes

METODO DE FILTRACIÓN POR
MEMBRANA PARA DETERMINACION DE
COLIFORMES Y E. coli EN AGUA
Sección Microbiología
de Alimentos

1.

PRT-712.03-009

Fecha emisión:
10/05/1992
Revisión: 5
Fecha revisión:
06/11/2008
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OBJETIVO
Este método se utiliza para medir la calidad sanitaria del agua potable.

2.
CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE
Se aplica a agua clorada o aguanaturales de muy baja contaminación y sin turbidez.
3.

4.

FUNDAMENTO
En la técnica de filtración por membrana, el grupo coliformes se define como todas las
bacterias aeróbicas y anaerobias facultativas, Gram negativas, no esporuladas que desarrollan
una colonia roja con brillo metálico dentro de 24 horas de incubación en un medio tipo Endo
conteniendo lactosa. El grupo coliformes producealdehídos por la fermentación de la lactosa.
E. coli bacteria perteneciente al grupo coliformes, que en un medio adecuado y a una
temperatura restrictiva de 44,5 ºC +/- 0,2ºC, fermenta la lactosa produciendo ácido, gas, posee
actividad β-D-glucoronidasa y actividad triptofanasa. Son negativas a la actividad oxidasa y
ureasa.
La norma NCh 409, en su versión 2005, señala que: “Todas las muestras quese analicen
mensualmente en un servicio de agua potable, deben estar exentas de E.coli. Para la
verificación de este requisito, en las muestras en las que se haya detectado la presencia de
coliformes totales, se debe confirmar adicionalmente la ausencia de E. coli”.
REFERENCIAS
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 21 ª Ed. 2005. 9222B
Standard Total Coliform MembraneFilter Procedure.

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TERMINOLOGÍA

Grupo Coliformes: todas las bacterias que desarrollan una colonia roja con brillo metálico dentro
de 24 horas de incubacióna 35 °C en un medio tipo Endo conteniendo lactosa.
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MATERIALES, INSUMOS Y EQUIPOS

6.1. EQUIPOS
6.1.1. Bomba de vacío 15 cm Hg y < 25 Bar de presión
6.1.2. Baño de agua termoregulado a 44,5º ± 0,2ºC
6.1.3. Manifol o soporte
6.2. MATERIALES
6.2.1 Vasos de filtración plásticos de 47 mm de diámetro sin recipiente inferior (Millipore XX
11047.10).
6.2.2 Filtros de membrana de ésteresmezclados de acetato y nitrato de celulosa, poro de 0,45
um, superficie cuadriculada, que retengan los organismos a ser cultivados, estables, libres
de químicos que puedan inhibir o estimular el desarrollo microbiano, resistentes a la
filtración (5 minutos), envase de 200 unidades (Millipore HAWG 047 S1).
6.2.3 Placas Petri plásticas estériles de 47 mm. de diámetro, cj 100 unidades (MilliporePD10
047 00).
6.2.4 Matraces de 2000 mL con Silica gel.
6.2.5 Botellón de 25 000 mL.
6.3. MEDIOS DE CULTIVO Y DILUYENTE
6.3.1 Agar M-Endo Les
6.3.2 Agua de dilución buffer fosfato estéril
6.3.3 Caldo Lauril Sulfato Triptosa (LST)
6.3.4 Caldo Bilis Verde Brillante (BVB)
6.3.5 Caldo EC-MUG

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DESARROLLO

7.1 RECUENTO COLIFORMES
7.1.1

Colocar la membrana de 0,45 mm en el soporte con pinza estéril.

7.1.2

Homogeneizar la muestra agitándola vigorosamente 25 veces, con movimientos de arriba
abajo.

7.1.3

Verter 100mL. de la muestra, en elvaso del filtro y aplicar vacío, para hacer pasar la
muestra a través de la membrana. El vacío no debe exceder de 15 libras de presión.

7.1.4

Enjuagar el vaso tres veces, con porciones de 20 a 30 mL. cada vez, de agua de dilución,
y aplicar vacío igual que en la muestra.

7.1.5

Cada vez que se procesen muestras incorporar un control de esterilidad de agua de
dilución. Si se...