Colimetria Nmp

Nom:

Informe nº
Iniciat:
Acabat:
Total hores:

COLIMETRIA MÈTODE NMP

CFGS: Química ambiental Crèdit 4: Tècniques d'anàlisis microbiològiques d'aigües.

1. Introducció
1.1 Objectius
Aïllar i determinar la presència de coliforms totals i fecals a l'aigua pel mètode del NMP (número més probable).
1.2 Fonaments teòrics
El grup de coliform pertany a la família Enterobacteriacaei inclou altres gèneres: Escherichia, Citrobacter, Enterobacter i Klebsiella. Es troven a l'intestí de l'home i dels animals, però també en altres ambients com el sòl, plantes, etc., per això no són bons indicadors de la contaminació fecal. Malgrat això, la seva freqüència en femta, la seva fàcil detecció i la possibilitat que junt amb ells hi hagi altres microorganismes patògens, fa ques'utilitzin com principals microorganismes indicadors de la contaminació fecal. Els coliforms fecals són un subgrup dels coliforms totals i són capaços de fermentar la lactosa a 44°C, en canvi, els coliforms totals ho fan a 37°C. El mètode NMP comprèn una prova pressumptiva i una prova confirmativa. Es realitzen aquestes dues proves ja que una possitivitat en un tub de la primera no indica necessàriamentla presència del grup bacterià a determinar, sinó tan sols una pressumpció que caldrà determinar posteriorment. Si el resultat a la prova pressumptiva és negatiu ens permet determinar l'absència d'aquest grup bacterià en l'aigua examinada i la prova es donarà per finalitzada. Aquest mètode s'utilitza en mostres poc contaminades, en mostres molt contaminades és més precís el mètode de recompte enplaca. Si la mostra problema es sospita altament contaminada i es fa amb el mètode NMP es faran dilucions de la mostra inicial.

2. Material
2.1 Reactius
- Alcohol per esterilitzar el material de treball.
- 100 ml de mostra problema d'aigua:
1. Mostra aigua aixeta.
2. Mostra aigua pou.
- Medis de cultiu:
1. Agar EMB (o EAM): aïllament selectiu de bacils Gram-, permet eldesenvolupament de totes les espécies de la família d'enterobacteris.
2. Agar TSA (Agar Soja Triptona): medi d'ús general, adequat per creixement de microorganismes aerobis i anaerobis.
3. Brou BGBB: medi selectiu, inhibeix el creixement de microorganismes que no pertanyin al grup de coliforms.
4. Brou MacConkey: medi de cultiu selectiu, adequat per creixement de bacteris Gram-. Tint 1/6 roig neutreamb lactosa I peptona. Medi amb sals biliars (tint de cristall violeta) per inhibir el creixement de Gram+.
5. Kobacs-oxidasa.
2.2 Material de vidre
- Got de precipitat
- Tubs d'assaig
- Campanes de Durham
- Vareta
2.3 Material divers
- Plaques de Petri
- Nansa de Kolle
- Gradeta
- Pinces
- Pipeta automàtica
- Puntes de plàstic estèrils per micropipeta de 10, 1 i 0'1 ml
-Hisop
- Cinta d'autoclau
- Membranes de filtració de diàmetre 47 mm i 0'45 µm
- Bastonets Kovacs-Oxidasa
- Taps metàl·lics
-2.4 Aparells
- Bec Bunsen
- Campana d'esterilitat
- Autoclau. P-Selecta (Presoclave 75)
- Estufa de cultiu
- Campana de flux laminar. Telestrar CV-100
- Balança analítica. KERN 770.
- Microones
- Nevera
3. Procediment
A) Es prepara els medis decultiu seguint les instruccions de les etiquetes corresponents: MacKonkey, EMB, TSA i BBGB. B) Colimetria
DIA 1 1. En primer lloc de les mostres molt contaminades es far un banc de dilucions. - L'aigua problema es sembra en el medi de brou lactosat (brou MacConkey), que permet l'enrequeiximent i identificació de bacteris coliforms. La lactosa existent és fermentada produÏnt gas que es detecta ala campana de Durham. Les sals biliars del medi inhibeixen el

2/6

creiement de bacteris Gram+ i bacils formadors d'endospores I no inhibeix els bacils entèrics Gram- ni altres ambientals (ex.: Pseudomones).
PROVA PRESSUMPTIVA:
1. Sembrar 10 ml de la mostra en 3 tubs amb 10 ml de brou MakConkey doble concentrat. Agitar suaument i afegir la campana de Durham.
2. Sembrar 1 ml de la...