coloraciones

Coloraciones
GRAM:
•    Preparar un extendido fino del material a colorear y dejar secar al aire.•    Fijar al calor, pasando el preparado 3 o 4 veces dentro de la llama del mechero bunsen.•   Cubrir el portaobjeto con cristal violeta durante 1 min. y lavar con agua corriente. Eliminar el exceso de agua.•    Cubrir el portaobjeto con solución de lugol  durante 1 a 2 min. y lavar con aguacorriente. Eliminar el exceso de agua.•    Sostener el porta-objetos entre el dedo pulgar e índice y decolorar con alcohol-acetona. (10 seg.) La decoloración es el paso más crítico del procedimiento deesta técnica. la tendencia a sobredecolorar hace que bacterias Gram positivas aparezcan Gram negativas.•    Lavar inmediatamente el portaobjetos con agua corriente para remover el alcohol-acetona yfrenar la decoloración. Eliminar el exceso de agua.•    Cubrir el frotis con solución de fucsina o safranina durante 30 – 60 seg. Lavar con agua corriente.•    Control:     Gram positivo: StaphylococcusaureusGram negativo: Escherchia coliReactivos:–    Solución 1:  sol. madre de cristal violeta. Disolver 10 grs. de colorante en 100ml de alcohol 95%. Guardar en botella de vidrio durante un año.–   Solución de trabajo: filtrar 10 ml de la solución madre y agregar 40 ml de solución recién filtrada de oxalato de sodio al 1% o de H2O dest.–    Lugol: Disolver 25 gr de Iodo cristalino + 50 g IK + 500ml H2O dest. Guardar botella color caramelo.–    Decolorante: Partes iguales de etanol 95% y acetona. Guardar frasco color caramelo a TA (temperatura ambiente).–    Contracolorante:a)    Safranina:tomar 20 ml de solución de safranina al 2,5 % en etanol 95% y agregar 180 ml de H2O dest.b)    Fucsina básica: disolver 0,1 o o,2 g de fucsina básica en 100 ml de H2O dest. Guardar en botella oscuradurante un año.
GRAM WEIGERT
Recomendado para observar quistes de Pneumocystis carinii.
•    Fijar con metanol tres minutos.•    Cubrir con eosina amarilla durante 5 minutos.•    Lavar con  agua y...