Colorantes y reactivos

PRÁCTICA Nº 01

I.- TITULO: “PREPARACION DE COLORANTES Y REACTIVOS”

II.- OBJETIVO:

2.1.- Conocer la composición y preparación de los principales colorantes y reactivos usados en el laboratorio para la tinción de bacterias y/o algunas de sus estructuras.

III.- INTRODUCCION:
Las bacterias son casi incoloras, por lo cual resulta difícil verlas en el microscopio; hay queteñirlas para distinguir los pormenores de sus estructuras interna y externa, que sirvan de base para su identificación y clasificación.
En los primeros años de la bacteriología predominaban las sustancias tintóreas naturales, de las que actualmente sólo se emplean unas pocas. Gradualmente las han reemplazado los colorantes artificiales o sintéticos. Como los primeros tintes de ésta clase seobtuvieron a partir de la anilina, es corriente llamarlos tintes o colorantes de anilina, a pesar de que muchos de ellos no proceden de este compuesto, ni tienen relación con él.
Los colorantes son compuestos químicos que tienen la capacidad de comunicar su color a otros cuerpos y quedar fijados a pesar de ser lavados con solventes ácidos o álcalis débiles. La coloración que así se obtiene, sedebe a una absorción selectiva de la luz, lo que da como resultado, cuerpos coloreados con un color complementario del que ha sido absorbido.
Muchos colorantes son moléculas cargadas positivamente o negativamente es decir son cationes o aniones, los que dan las reacciones correspondientes cuando se unen a otras moléculas con cargas complementarias.
Muchas veces, los colorantesnecesitan de la adición de otras sustancias con la finalidad de aumentar o de dar una afinidad química que ellos, o el cuerpo, no poseen. Estas sustancias se denominan mordientes y también pueden ser aplicadas en forma independiente. La combinación mordiente más colorante forma lo que se denomina laca.
En bacteriología se emplean colorantes básicos y ácidos. Estos últimos sirven sobre todo parateñir el citoplasma, los básicos tiñen más intensamente los componentes básicos de la sustancia nuclear.
Por todo esto, es necesario que en el laboratorio se disponga de los materiales necesarios para la preparación de estos colorantes y de otros reactivos indispensables para la aplicación de las diversas técnicas que suelen emplearse en la evaluación y reconocimiento de los distintosmicroorganismos que se estudian en él.

IV.-MATERIALES Y REACTIVOS

- Azul de metileno.
- Alcohol etílico (95°,99°).
- Solución acuosa de KOH al 0.01%
- Colorante safranina en polvo.
- Agua destilada.
- Acetona .
- Acido clorhídrico concentrado.
- Alcohol absoluto al 95%.
- Cloruro de sodio.
- Yodo.
- Verde de malaquita en polvo.
- Cristal Violeta .
-Oxalato de amonio.
- Fucsina básica en polvo.
- Fenol (ácido fénico o carbólico).
- Yoduro de potasio.
- Azul de toluidina.
- Acido acético glacial.
- Dicromato de potasio.
- Fenol (solución acuosa al 5%).
- Acido acético (solución acuosa al 20%).
- Cloruro férrico (solución acuosa al 30%).
- Fucsina ácida (solución acuosa al 1%).
- Formol al 40%.
-Acido tánico.
- Acido sulfúrico.
- Tinta china.
- Colorante en polvo Negro Sudan B o Sudan III.
- Rojo de Congo en polvo.
- Nitrato de plata.
- Solución de amoniaco al 10%.

V.- PROCEDIMIENTO:

Cristal Violeta - Oxalato de amonio de Hucker o Violeta de genciana-Oxalato de amonio de Hucker.

Para 50 ml:
Solución “A”Solución “B”
- Cristal Violeta 1gr - Agua destilada 40ml
- Alcohol etílico 10ml - Oxalato de amonio 0,4gr

*Mezclar soluciones “A” y “B”, filtrar.

Solución Argentica Amoniacal de Fontana

- Nitrato de plata 5gr
- Solución de amoniaco al 10% 10ml
- Agua destilada...