colorimetria y espectometia visible

PRACTICA N°1
COLORIMETRIA
FUNDAMENTO TEORICO
El análisis colorimétrico forma parte del análisis químico fotométrico, que se basa en la medición de la cantidad de luz absorbida por una solución coloreada (espectrofotometría, colorimetría) o por una suspensión (turbidimetría) o en la cantidad de luz difundida por una suspensión (nefelometría). En colorimetría, generalmente se usa luz blanca, ylas determinaciones se efectúan con un colorímetro. En el caso que el equipo cuente con una celda fotoeléctrica para la medición el instrumento será un fotocolorímetro.Las técnicas fotométricas se fundamentan en la capacidad que tiene la luz de ser absorbida en un determinado medio. En una técnica fotométrica, siempre habrá una fuente luminosa, un medio que absorba la luz y un artefacto que seacapaz de medir la intensidad de la luz transmitida a través del medio absorbente.

La base de estas técnicas de medición es la variación de la intensidad del color de una matriz (el medio absorbente). Esta variación es producida por la cantidad relativa o concentración de algún componente del sistema.
Para el caso la selección del color a usar es mediante un filtro.
La ventaja de uno respectodel otro está en la selección del color que representa una determinada longitud de onda. En el caso del espectrofotómetro se dispone del espectro completo con una vasta gama de longitudes de onda a seleccionar. En el caso del fotocolorímetro sólo se dispondrá de las longitudes de onda incorporadas en el filtro.
El espectrofotómetro es un instrumento más versátil que el fotocolorímetro, sinembargo su desventaja está en su costo siendo este sustancialmente más alto.
Cuando llega luz (monocromática o heterocromática) a un medio homogéneo, una parte de la luz incidente se refleja, otra es absorbida por el medio y el resto es transmitida. Si la intensidad de la luz incidente es I0, la de la luz absorbida Ia, la de la transmitida It y la de la luz reflejada Ir, se tiene:I0 = Ia + It +Ir
Para interfaces aire vidrio, que son las que se tienen al efectuar las determinaciones con cubetas de vidrio, un 4% de la luz incidente se refleja. En la medición, se puede eliminar Ir empleando una cubeta de comparación similar; en tal caso:
I0 = Ia + It
En 1760, Lambert investigó la relación entre I0 e It e It;posteriormente, en 1852, Beer estudió la absorción de la luz por las soluciones. La espectrofotometría y la colorimetría, se basan en las leyes de Lambert y de Beer.
La Ley de Lambert - Beer establece que cuando pasa luz monocromática por un medio transparente, la disminución de la intensidad, con el espesor del medio, es proporcional a la intensidad de la luz, lo que equivale a decir que laintensidad de la luz transmitida disminuye exponencialmente al aumentar aritméticamente el espesor del medio absorbente, o que espesores iguales de un mismo medio absorben la misma fracción de la luz incidente.
Se puede expresar esta ley mediante la ecuación:
Log ( I / It) = A = a * b * C
Donde:
A = absorbancia o densidad óptica
a = coeficiente de absorción (propio de cada sustancia a unadeterminada longitud de onda)
b = espesor de la cubeta de medición expresada en centímetros
C = concentración del analito
La transmitancia, conceptualmente equivalente a la cantidad de luz que sale del medio, se expresa según la ecuación:
T = It / I0
Reemplazando en la ecuación de la Ley de Lambert – Beer se tiene.
A = -Log T

Para fines prácticos, en la cuantificación de analitos de interésclínico se puede fácilmente llegar a establecer que, en aquellas soluciones que se cumple la Ley de Lambert – Beer, la concentración de la sustancia X comparada contra una solución de la misma sustancia X en concentración conocida (estándar) estará definida por:
Cx / Ax = Cstd / Astd
Despejando Cx queda:
CX = Cstd *AX / Astd.
En términos generales, el colorímetro es el dispositivo que permite la...