Colorimetro Y Espectrofotometria

COLORIMETRO Y ESPECTROFOTOMETRIA

I.- Generalidades:
Muchos métodos para el análisis cuantitativo de sangre, tejido y orina se basan en la producción de soluciones coloreadas en tal forma que la intensidad del color obtenido puede usarse como medida de concentración de la sustancia problema. La medida de la intensidad del color como índice de la concentración es lo que se llama colorimetría ylos aparatos en los que se hace la comparación de colores para la valoración de concentración se llaman colorímetros.
Las soluciones coloreadas exhiben determinado color porque al pasar a través de ellas son absorbidas radiaciones de longitud de onda diferente y complementaria de las que atraviesan la solución, además la luz blanca que entra en una solución coloreada emerge de la misma conintensidad disminuida y mientras mas oscuro sea el color o mas intenso, mayor debe ser el grado de absorción a cierta longitud de onda. Los procedimientos analíticos que se basan en la medida directa de la intensidad del color en términos de absorvancia en longitudes de onda específico se conoce como fotométricos y el instrumento que se usa es el fotómetro.
Los procedimientos colorímetros estánlimitados a la porción visible del espectro, mientras que los principios generales de la fotometría son aplicables también a la absorción de energía en las porciones ultravioleta e infrarroja del espectro.
El espectro óptico o electromagnético está constituido por una gama de radiaciones que van a ser detectadas por instrumentos especiales que reciben diversos nombre:
FOTOCOLORÍMETROS:
Cuya zona deobservación es en la región del visible (400 – 750nm)
ESPECTROFOTOMETROS:
Cuya zona de observación corresponde a diversas regiones del espectro electromagnético. Existen:
Espectrofotómetro Ultra Violeta.- La observación corresponde a la región U.V. (400 – 10nm)U V cercano 200 – 400 nm UV lejano 10 – 200nm.
Espectrofotómetro Infrarrojo.- Cuya observación corresponde a la región comprendida entre760 – 10000 nm.
En un esquema simplificado se puede describe un fotómetro como aquel equipo que consta de una fuente luminosa de intensidad constante, un selector de ondas luminosas determinadas longitud de onda que puede ser un filtro, un prisma o una retícula de difracción, una celda de absorción en donde se colocan las muestras o soluciones problema; que puede ser un tubo calibrado o unacubeta de cuarzo material adecuado, un dispositivo fotoeléctrico, que transforma la luz en corriente eléctrica o un galvanómetro micro amperímetro para medir la intensidad de la corriente eléctrica generada, la cual es la función de la transmitancia o de la Densidad Optica o Absorbancia.

La Ley de Lamberty Beer, relaciona la intensidad de la Luz Incidente I0 y la Luz Transmitida It en función de laconcentración de la muestra problema.

A=logI0It=e* l* c
Donde:
A = Absorbancia
e = coeficiente de Extinción
l = Espesor de la cubeta en cm
c = Concentración de la muestra
A=log1T
A Aumenta conforme disminuye la transmitancia y Viceversa. (Relación logarítmica)

II.- OBJETIVOS:
1.- Determinar la curva espectral de un colorante.
2.- Demostrar la ley de Lambert Beer.
3.- Determinarfotométricamente la concentración de una sustancia problema.
III.- MATERIALES Y REACTIVOS:
Espectro fotómetro ó Colorímetro.
Tubos de prueba.
Fiolas.
Pipetas.
Vagueta.
Vasos.
Permanganato de Potasio. (KMnO4)

IV.- PROCEDIMIENTO:
A) Determinación de la curva Espectral: Se denomina así a los distintos valores de absorbancia que presenta una sustancia o colorante frente a diversaslongitudes de onda.
Paso 1:
- Preparar una solución de Permanganato de Potasio 0,04% (Solución Stock), almacenar en frasco oscuro o protegerla de la luz. Diluir 1ml de dicha solución en 9ml de Agua. Preparar el sistema de lectura en el espectrofotómetro.
Leer la absorbancia o Densidad Óptica usando el rango de la luz visible (400 – 700nm); previamente se debe cerrar el equipo con un Blanco de...