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Páginas: 5 (1189 palabras) Publicado: 11 de mayo de 2013



RECUENTO DEL NÚMERO DE BACTERIAS
T. de la Rubia y J. Martínez


OBJETIVOS
El alumno aprenderá a:
1. Utilizar correctamente pipetas y micropipetas preparando diluciones decimales seriadas de una suspensión de bacterias

2. Determinar la concentración bacterias viables (entendidas como unidades vormadoras de colonias) en una muestra

Contenido:
I INTRODUCCIÓN
II MÉTODOS
IIIRESULTADOS
IV AUTOEVALUACIÓN



















I. INTRODUCCIÓN
En diversos estudios microbiológicos (como análisis de alimentos, de agua de bebida, de productos farmacéuticos o del medioambiente entre otros), se requiere conocer el número de microorganismos presentes en un material con objeto de determinar su calidad. El procedimiento es esencialmente el mismo que para lamedida del crecimiento de las poblaciones de bacterias
El crecimiento de poblaciones microbianas puede determinarse mediante métodos de medida de la masa total celular, que generalmente es directamente proporcional al número de células, (métodos de determinación del peso, de la actividad del cultivo o métodos turbidimétricos) o por la determinación del número de células.
Encontrará informaciónmás completa sobre medidas del crecimiento de bacterias en los apuntes on line del Profesor D. E. Iañez
1. Principales métodos de recuento del número bacterias en una muestra

El número de bacterias de una muestra puede determinarse directamente por recuento del número total de células o indirectamente por la estimación del número más probable, por filtración o por el recuento de viables en placa(Células capaces de dividirse sobre o dentro de un medio sólido, también se refieren como unidades formadoras de colonias UFC).
1.1.Recuento directo de bacterias al microscopio
Es una técnica para determinar o recontar el número total de organismos de una muestra: Se utilizan cámaras de recuento (Cámara de Petroff-Hauser) y visualización al microscopio. Es un método rápido del número total decélulas de una muestra pero no distingue entre viables o no viables.
1.2.Recuento directo con contadores electrónicos
Se utiliza el contador Coulter recuenta el número de células suspendidas en un líquido, a su paso por un orificio por donde fluye la corriente eléctrica. Se puede determinar a su vez el tamaño de las células pero tampoco distingue entre viables, muertas o partículas.
1.3.Recuento en filtros de membrana
En este método el recuento se realiza por filtración de un volumen de la muestra a través de un filtro de membrana de tamaño adecuado para retener a las bacterias (0.22-0.45 µm). Una vez filtrada la muestra, el filtro se coloca sobre un medio de cultivo sólido y se incuba. El recuento del número de colonias formadas sobre el filtro determina el número total debacterias en la muestra filtrada. Es un método útil cuando el número de bacterias presentes en la muestra es muy bajo. Se utiliza con frecuencia para determinar el número de bacterias en agua.
2. Métodos de recuento de bacterias viables en placa

Estos métodos ofrecen la ventaja de cuantificar solo a las bacterias viables presentes en una muestra. Implican la dilución seriada de la muestra en agua,caldo o solución salina, la inoculación de la dilución en medio de cultivo sólido y la incubación durante 24-48 horas a la temperatura apropiada y en placa son métodos de estimación de bacterias viables en término de unidades formadoras de colonias (UFCs).
El número de unidades formadoras de colonias de una suspensión bacteriana puede determinarse mediante dos técnicas:

2.1. Recuento en placapor siembra en profundidad.
Consiste en añadir medio de cultivo fundido y enfriado a 50ºC sobre placa de Petri que contiene una cantidad determinada de la muestra diluida. Se tapa la placa y se rota para mezclar la muestra en el agar. Cuando el agar solidifica se incuban las placas. Las colonias se desarrollan tanto dentro del agar como en la superficie. Es un método generalmente utilizado para...
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