COMPLEMENTO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESPECIALIDAD MICROBIOLOGÍA

TEMA N06:
INMUNOHEMÓLISIS DEL
COMPLEMENTO
Curso
: Inmunología II
Docente : Aurelio Carrasco Venegas
Alumno : Delgadillo Coronado, Pedro
Mauricio

OBJETIVOS

 Determinar la funcionalidad de la vía clásica del
complemento mediante la técnica de Inmunohemólisis.
 Comprender las funciones y vías de activación del
sistema del complemento.Marco teórico
El sistema del complemento es parte de la inmunidad innata y constituye uno de los principales
mecanismos efectores de la inmunidad mediada por anticuerpos.
El sistema del complemento está compuesto de más de 30 proteínas en el plasma y en la superficie de las
células, dentro de las cuales hay proteasas, inhibidores, inactivadores y receptores. La concentración de las
proteínas delcomplemento en el plasma es de más de 3 g/L y constituye aproximadamente el 15% de la
fracción de globulina.

Figura N01: Estimulación de la fagocitosis por Opsonización.
http://es.scribd.com/doc/86573111/Guia-practica-de-complemento-septiembre-2011#scribd
BARRON –PEREZ. EL SISTEMA DEL COMPLEMENTO. ALERGIA, ASMA E INMUNOLOGIA PEDIATRICA. AGOSTO 2003

Marco teórico
Tabla N01: Funciones delcomplemento
Actividad

Defensa del huésped contra
infecciones

Opsonización
Quimiotaxis
leucocitos

Integración entre la inmunidad
innata y adaptativa

Factores del
complemento
involucrados

C3b, C4b, C3dg, iC3b  
CR3, CR4, CR1
y

activación

de

Lisis bacteriana y celular

Complejo de ataque de 
membrana (C5b-C9)

Memoria inmunológica

C3d, receptores CR2 células B y c
élula folicular dendrítica.Incremento en la respuesta por
anticuerpos
Eliminación de desechos

Anafilotoxinas-receptores de
anafilotoxinas en leucocitos

Limpieza de inmunocomplejos

Unión de C3b y C4b a los
complejos inmunes y a los
antígenos foliculares
C1q, fragmentos de C3 y C4 ligad
os covalentemente.

Remoción de células apoptósicas

Traducido y modificado de: MACKAY I., ROSEN, F., WALPORT, M., et al. (2001) Advances inImmunology: Complement.
The New England Journal of Medicine, Vol 344, 14, 1

Marco teórico
Vías de activación del complemento

Figura N02: Vías de activación del complemento
http://defesasnaoespecificas.blogspot.com/2012_12_01_archive.html

Marco teórico
El análisis del sistema del complemento se realiza en  el marco de varias entidades clínicas, entre ellas: Lupus
eritematoso sistémico, artritisautoinmune, angio edema, síndromes de  vasculitis, nefritis, infecciones recurrentes.
Recientemente incluso se ha implicado al análisis del complemento en desórdenes neurodegenerativos como el
Alzheimer, esclerosis múltiple, Guillain-Barré.
Las pruebas cuantitativas, usualmente analizan las concentraciones de componentes específicos del complemento e
incluyen ensayos inmunoquímicos. Las pruebascualitativas o ensayos funcionales miden la actividad total del
complemento (lisis) en las distintas vías de activación.

Figura N03: Eritrocitos en sangre
http://es.scribd.com/doc/86573111/Guia-practica-de-complemento-septiembre-2011#scribd

Materiales
 3 tubos de 10mL sin anticoagulante.
 3 tubos de 10mL con anticoagulante (EDTA).
 Micropipetas de 20µl y 100µl.
 Pipetas de 5 y 10 mL.
Centrifuga.
 Refrigeradora.
 Baño maría.
 4 agujas numero 21.
 Ligadura, torundas.
 Buffer fosfato salino (PBS)
 Solución salina (NaCl) al 0,9%

Procedimiento
1. Descomplementación del suero de la sangre tipo “O”

Se extrajo sangre
tipo O 10mL

Se sometió a un proceso de
descomplementación
(calentar a 550C/20min.)

Se centrifugo a
3000 rpm por 10
minutos

Se extrajo el
suero del tubo
con sangreO

Procedimiento
2. Separar el plasma de la sangre tipo “A” y “B”

Se extrajo sangre
tipo A y B 10mL (con
anticoagulante)

Se guardo el
plasma en
refrigeración

Se centrifugo a
3000 rpm por 10
minutos

Se extrajo el plasma
de los tubos con
sangre A y B

Procedimiento
3. Lavado de eritrocitos y preparación de la dilución al 2% de la sangre tipo “A” y “B”
Centrifugar
a 1500
rpm por 10
´...