Componentes Del Medio De Cultivo Y Preparacion

INTRODUCCION

El cultivo de tejidos vegetales como se considera una herramienta de la biotecnología vegetal que aísla partes de una planta y las hace crecer en un medio de cultivo artificial in vitro en condiciones de asepsia para obtener metabolitos, tejidos, órganos o plantas completas.

Diversas plantas de interés agroalimentario, ornamental o manipuladas genéticamente, se propagan oregeneran vegetativamente. Asimismo, en algunos casos es preciso emplear técnicas de propagación vegetativa para erradicar infecciones por virus, lograr la propagación de especies en las cuales es difícil hacerlo naturalmente, y para introducir variaciones genotípicas que aumenten la calidad de los productos.
Las técnicas de cultivo in vitro de tejidos vegetales proporcionan los medios para producirasexualmente gran número de clones o generar material libre de virus mediante cultivo de meristemos; además de la regeneración de plantas completas a partir de órganos, tejidos, protoplastos y células aisladas. Esta técnica se caracteriza porque se multiplican las plantas rápidamente en un corto periodo de tiempo utilizando poco espacio y manteniendo el cultivo en condiciones óptimas decrecimiento y en ausencia de patógenos. El cultivo in vitro de tejidos puede aplicarse tanto para la recuperación de plantas en peligro de extinción como para la mejora mediada por transformación genética. Los métodos de transformación genética de plantas permiten la introducción de nuevos genes que generen cambios específicos en las plantas; siendo una alternativa a la mejora genética clásica.Generalmente los medios de cultivo se encuentran constituidos por macronutrientes, micronutrientes, suplementos de hierro, vitaminas, fuentes de carbono, myo-inositol, y reguladores de crecimiento, todos estos complementos ayudan a un desarrollo de plantas viables ya que sirven como suplemento nutritivo para dicho desarrollo.




OBJETIVOS

• Conocer los componentes necesarios para la elaboración deun medio de cultivo in vitro.
• Conocer la función de cada uno de los componentes del medio de cultivo.
• preparar de medios de cultivo para el crecimiento in vitro de material vegetal.
• Realizar cálculos para hallar volúmenes y masas de los componentes que se requieran para un determinado volumen de solución.





MATERIALES

• Balanza gramera(DENVER)
• Micropipeta de 200ul(Nichipet Ex)
• Plancha de calentamiento ( Heidolph modelo MR 3001)
• Balanza analítica (SCIENTSH)
• Autoclave industrial
REACTIVOS
• Myo inisitol 99% ps ( PANREAC) lote: 15B695.1208
• Tiamina
• Sales macro y micronutrients ( haluros, Fe Na EDTA, nitratos, solucion madre sulfato, P Bo y Mo)
• Sacarosa comercial
• Agar (biopruebas Ltda) Ref: Bio 151-1kg ;lote: 626
• Acido acético 45%
• 2.4DPROCEDIMIENTO Y RESULTADOS

1. Se procede a realizar los cálculos correspondientes de los componentes para el medio de cultivo a preparar:

TABLA 1
Proporción de componentes para 1L de solución.

1 Macronutrientes y micronutrientes 10mL
2 Sales mioinositol 100mg
3 Tiamina 1mL
4 Sacarosa 30g
5 Regulador de crecimiento 2.4D 100mg/ml
6 Agar 7.5gr

TABLA 2: en esta tabla se indica laconcentración de 2.4D a la cual, se desea preparar los medios de cultivos para dos tipos de vegetales. Y el número mínimo de repeticiones.

2.4D(100mg/ml) [ ] MATERIAL REPETICION
2.0 ñame 3
2.0 zanahoria 3
3.0 ñame 3
3.0 zanahoria 3


CALCULOS:

Se requirió preparar una solución de 200ml con la misma proporción de componentes que la indicada en la tabla 1

 Para macro y micronutrientes:

Si 1000ml 10ml X= 200*10/1000
200ml x = 2ml

 Para sales mioinositol:

Si 1000ml 100mg
200ml x x= 200*100/1000
= 20mg = 0.02gr...