Conc


INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Ingeniería Bioquímica
Laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular


Práctica No. 5.5: Efecto de la Concentración del Sustrato sobre la Velocidad de Reacción
Alumnos: Canova Ortega Sharon Michel.
López Luis Mario Angel
Martínez Juárez Mariana
Grupo: 3IM2
Sección: 3

INTRODUCCIÓN:

Efecto de la concentración de sustratoen la actividad de la enzima

En las reacciones catalizadas por enzimas, generalmente se obtiene una dependencia hiperbólica de la velocidad respecto a la concentración de sustrato, distinguiéndose 3 partes distintas en la curva.
1. En la primera parte, a bajas concentraciones de sustrato, la velocidad es proporcional a la concentración de sustrato, de tal manera que si se duplica laconcentración de sustrato, se duplica la velocidad (reacción de primer orden).
2. La segunda parte de la curva, a concentraciones intermedias de sustrato, la velocidad se incrementa menos que en la primera parte con el incremento de la concentración, iniciando alrededor de la ½ de la Vmax.
3. La última parte de la curva, a altas concentraciones de sustrato, la velocidad es independiente de laconcentración de sustrato (reacción de orden cero), así la velocidad alcanzada es cercana a la máxima.

Efecto de la concentración de enzima en una reacción catalizada por enzimas. Curva de saturación de una enzima. La curva se ajustó a la ecuación michaeliana. Se muestran los parámetros cinéticos característicos de una enzima, Km y Vmax.
A pesar de que la curva del efecto de la concentración de sustrato en lavelocidad de la enzima es compleja, existe una ecuación matemática que expresa la relación que existe entre las variables: la hipérbola cuadrática o también denominada ecuación de Michaelis Menten

En la ecuación de Michaelis-Menten hay dos variables que son la velocidad (v) y la concentración de sustrato [S]. La Km y la Vmax son constantes. La Km es llamada la constante de Michaelis-Menten. Elvalor de Km de una enzima para un sustrato específico es la concentración del sustrato a la cual la velocidad de la reacción es la mitad de la velocidad máxima. La Vmax es la velocidad teórica máxima de la reacción catalizada por la enzima. A concentraciones muy altas de sustrato el valor de la velocidad se aproxima al de la velocidad máxima de la reacción, pero nunca se llega a ésta. Los valoresde Km y Vmax son característicos de una enzima, y se conocen como parámetros cinéticos de la enzima. Aunque son constantes, dependen de las condiciones en las que se lleva a cabo la reacción, ya que hay que recordar que la enzima es una proteína cuya estructura y carga eléctrica se modifican cuando los componentes de la solución cambian. Una manera para obtener los valores de Km y Vmax de unaenzima es graficando los valores de velocidad contra la concentración de sustrato. Este método tiene la desventaja de que se grafica una curva y no una línea recta, por lo que la interpolación es difícil.
Para linealizar la curva se debe utilizar la expresión matemática de Lineaweaver-Burk, también llamada de dobles recíprocos:



OBJETIVOS:
Observar el efecto de la concentración del sustrato sobre lavelocidad de la reacción enzimática y determinar la constante de Michaelis-Menten por los métodos conocidos, así como su aplicación.







RESULTADOS SOBRE EL EFECTO DE LA CONCENTRACION DEL SUSTRATO SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCIÓN

Figura 1.- Curva Tipo de Azúcares Reductores

Interpolando los valores de absorbancia obtenidos en la práctica del efecto de la concentración del sustrato sobre lavelocidad de reacción en la curva tipo (Figura 1), obtenemos las siguientes concentraciones de sustrato.
Tabla 1. Interpolación de Absorbancia vs [Az. Reductor] para el cálculo de la Velocidad de reacción

Tubo
Absorbancia (nm)
[Az. Reductor] (M)

Testigo
0
0

1
0.199
5.1089

2
0.188
1.9891

3
0.31
5.3133

4
0.282
4.5504

5
0.435
8.1743

6
0.439
8.8283

Ya que se obtuvieron los valores de...