Concentración y curvas estándar

CONCENTRACIÓN Y CURVAS ESTÁNDAR
Andrea Alatorre Troncoso, Moisés Dina Pineda y Pamela Narváez Torres
Laboratorio de Biología Molecular de la Célula II, Facultad de Ciencias, UNAM, México, D.F.

Entregado: 02-IX-2010

Resumen: La concentración se refiere a la cantidad de soluto que hay contenido en una masa o volumen de solución o solvente. Existen varias formas de expresar y calcularconcentraciones. La curva estándar o patrón es una descripción cuantitativa y resumida que sirve como referencia para determinar la concentración de una sustancia, particularmente proteínas y DNA, en una alícuota. Con el objeto de conocer la confiabilidad de nuestro trabajo experimental en el laboratorio y el de poner en práctica conocimientos teóricos sobre la determinación de concentraciones,realizamos mediciones y cálculos de curvas patrón para el caso de agua destilada y proteína por el método de Biuret. Los resultados para el caso del agua nos indican que nuestras mediciones fueron confiables y que la utilización de curvas estándar como referencias para interpolar valores de nuevas mediciones fue determinante.

INTRODUCCIÓN

Una solución es una mezcla en que dos o más sustancias sehan unido en una dispersión homogénea. A la sustancia que se encuentra en mayor proporción se le llama disolvente y soluto al compuesto que se encuentra en menor proporción. La solubilidad de un soluto es la máxima cantidad que se disolverá en una cantidad dada de disolvente a una temperatura específica. Se pueden utilizar varias formas para expresar la concentración de una solución, mismas que a suvez pueden ser clasificadas por las unidades que utilizan en: unidades físicas y unidades químicas. Una forma de determinar la concentración de sustancias cuya concentración desconocemos es el empleo de curvas estándar o de calibración como un método cuantitativo, resumido y confiable. La curva patrón ofrece una relación empírica en comparación con una teórica, lo que resulta de gran utilidad enel análisis de resultados.

El método general para determinar la concentración de una sustancia en una muestra desconocida es comparando la muestra problema con un sistema de muestras estándar de la concentración sabida. Se representan los datos obtenidos y se obtiene la gráfica de la señal corregida frente a la concentración del analito. Lo normal es que la gráfica tienda a una línea recta,donde a medida que aumenta la concentración, la señal de respuesta es mayor (pendiente positiva). En el modelo de curva de calibración lineal, la pendiente vendrá dada por la ecuación matemática:

y = mx + b

Siendo m la pendiente, x la concentración e y la señal de respuesta.

La sensibilidad de calibración es la pendiente de la curva de calibrado. Por tanto en una curva de calibrado lineal lasensibilidad es siempre la misma y no va a depender de la concentración, ya que para que se cumpla y = mx + b, las concentraciones deben tener una incertidumbre insignificante.

Respecto a la exactitud, ésta resulta del grado de concordancia entre el resultado de una determinación o la media de n resultados y el valor “verdadero” del analito en la muestra
en cuestión. Toda medida tiene unfallo, por lo que el valor verdadero no lo conocemos. La respuesta instrumental es generalmente alta dependiendo de muchos factores como las impurezas encontradas, el tipo de solvente que se usa, podría también ser alterada por factores externos tales como presión y temperatura. En muchos ejemplos la curva estándar es la única manera de determinar concentraciones de muestras desconocidas.

Otraaplicación que tiene la implementación de curvas patrón es la de conocer la confiabilidad de mediciones hechas por el personal del laboratorio, una práctica que las más de las veces se ha estandarizado haciendo la medición del peso del agua.

Entre sus desventajas se encuentra que es necesario por fuerza un sistema estandarizado previo, para lo cual se debe contar con una fuente del material a...