Conceptos B Sicos De Citometr A De Flujo

Conceptos básicos de
Citometría de Flujo
Dr. Benigno A. Elías H.

¿QUÉ ES LA CITOMETRÍA DE FLUJO?
La citometría de flujo representa un método rápido, objetivo y

cuantitativo de análisis de células, núcleos, cromosomas,
mitocondrias u otras partículas en suspensión.

¿QUÉ ES LA CITOMETRÍA DE FLUJO?
Se basa en pasar células u otras partículas en suspensión alineadas y de

una en una pordelante de un haz luminoso.
La información producida puede agruparse en dos tipos fundamentales:
 la generada por la dispersión de la luz y
 la relacionada con la emisión de luz por los

fluorocromos presentes en
la célula o partícula al ser excitados por el rayo luminoso.

Las señales luminosas detectadas se transforman en impulsos eléctricos

que se amplifican y se convierten en señales digitalesque son procesadas
por una computadora donde se realiza el análisis cualitativo y cuantitativo

¿QUÉ ES LA CITOMETRÍA DE FLUJO?
Cuando una molécula absorbe luz, algunos de sus electrones

pueden alcanzar una órbita de mayor energía.
La molécula ha alcanzado un estado de excitación, y puede volver

a su estado basal cuando estos electrones vuelven a su órbita de
menor energía.
En algunoscompuestos el electrón excitado cae rápidamente al

estado basal, emitiendo un cuanto de luz o fotón y desprendiendo
energía.
A este tipo de compuestos se les denomina fluorescentes o

fluorocromos.

¿QUÉ ES LA CITOMETRÍA DE FLUJO?



Si previamente a su análisis se
coloca a las células en
presencia de anticuerpos
monoclonales marcados con
moléculas fluorescentes, se
puede evaluar qué células
poseenlos antígenos
complementarios a los
anticuerpos monoclonales
usados.

¿QUÉ ES LA CITOMETRÍA DE FLUJO?
1.Un haz de luz láser (A) envía un
rayo que es colimado (L1) y
enfocado (L2) por medio de lentes
sobre la cámara de flujo laminar (C),
luego de atravesar la cámara el rayo
de luz directa es detenido por una
pantalla (s), mientras que la luz
dispersada es enfocada por otra
lente (L3) sobre unfotodiodo (D1),
esto constituye el detector de
dispersión frontal (FSC). Con él se
evalúa el tamaño y volumen de las
células que pasan por la cámara.

2. La luz dispersada lateralmente y la
fluorescencia se enfocan por medio de una
lente sobre un espejo dicroico (M) que
refleja la mayor parte de la luz de igual
longitud de onda a la producida por la
fuente (A), atraviesa un filtro (F1) e incide
sobreun detector (D2). Esto constituye el
sistema de detección de dispersión lateral
(SSC). Este nos da información acerca de la
complejidad interna de las células (por
ejemplo la forma del núcleo, la cantidad y
tipo de gránulos citoplasmáticos o la
rugosidad de la membrana).

3. La luz que no es reflejada por el espejo dicroico, ya que tiene una longitud de onda diferente a la emitida, lo atraviesa eincide sobre un filtro interferencial (F2) que puede ser ajustado para una determinada longitud de onda, discriminando así
entre diferentes fluoróforos, para finalmente incidir sobre un tubo fotomultiplicador (D3), esto constituye el detector lateral
de fluorescencia (SFL).

¿QUÉ ES LA CITOMETRÍA DE FLUJO?


Estos datos son interpretados y procesados por el programa y
podremos seleccionar lascélulas que nos interesen dentro de un
cultivo de diferentes células en suspensión.

¿QUÉ ES LA CITOMETRÍA DE FLUJO?


Tipo especializado de citometría de
flujo: citómetro FACS, por sus siglas
en inglés (Fluorescence-Activated
Cell Sorting).



Esta técnica provee un método para
la clasificación y selección de células
provenientes de una mezcla de
varias poblaciones, según las
característicasparticulares de
dispersión y fluorescencia de cada
célula.

APLICACIONES CLÍNICAS DE LA CITOMETRÍA DE FLUJO
Inmunofenotipificación


La citometría de flujo permite el análisis de un gran número de células
(entre 10,000 células por muestra y más de un millón en los estudios
de enfermedad mínima residual).



La aplicación de la citometría de flujo al análisis celular permite
conocer aspectos...