contaje de microorganismos



Byron Ricardo Avilés Moreno
OBJETIVOS:
Conocer y comparar métodos de cuantificación de microorganismos.
FUNDAMENTOS:


MATERIALES:
Microscopio, espectrofotómetro, cubilete, cámara de Neubauer,pipetas, tubos de Eppendorf, tubos de ensayo.
MATERIAL BIOLOGICO:
Cultivo de microalgas y bacterias.
SUSTANCIAS:
Lugol, alcohol al 70%, medio de cultivo correspondiente a la muestra
PROCEDIMIENTO:1. CONTAJE EN CÁMARA DE NUEBAUER
Se tomó una muestra del cultivo en un tubo eppendorf y se le añadió 15 µL de lugol para fijar la muestra, se agito para homogeneizar.
Se colocó el cubre objeto limpiosobre la cámara
Se usó una pipeta, se depositó una alícuota de la muestra entre la cámara de NEUBAUER y el cubre objeto, en un ángulo de 45 º. Se observó el llenado de la cámara por capilaridad
Seesperó 2 minutos antes de proceder al contaje para dejar que la muestra se distribuya por la cámara.
Se contó los cuatro recuadros de las esquinas de la cámara, los cuales están subdivididos en 16cuadros.
Se recomendó seguir un orden al momento de contar las células dentro de los recuadros, para evitar errores

Se contó las células dentro del recuadro. Si las células tocan los límites del cuadrodeberán contarse solo las que se encuentran más de la mitad dentro de la línea.
Se registró el valor de cada recuadro contado, para luego se realizó los cálculos correspondientes mediante la fórmula:X 10000 X factor de dilución

Una vez que se terminó el conteo celular se limpió cuidadosamente el cubre y la plataforma de la cámara con alcohol al 70%, se secó con un paño y se guardó en surespectiva caja.
Si se realizó diluciones, se multiplica la sumatoria de células por la dilución efectuada antes de continuar con el desarrollo de la fórmula.
El resultado nos indicó el número de célulaspresentes por cada mililitros de cultivo ().
RESULTADOS:
X 10000 X 4 = 3´210.000
Muestra
Dilución
RE 1
RE 2
RE 3
RE4
PROMEDIO
CEL POR mL
Tetraselmis spp.

61
64
74
122
80,25
3´210.000

2. DENSIDAD...