Conteo Camara Neubauer

Technical Note - Neubauer Chamber Cell Counting -

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Oscar Bastidas

Conteo Celular con
Hematocitómetro
Uso Elemental del Hematocitómetro
Introduction

Materiales

A pesar del enorme desarrollo tecnológico que
ha tenido lugar en los laboratorios científicos, el
conteo visual
con hematocitómetro sigue
siendo el método de conteo más extendido
desde el siglo XIX.

Los elementos necesarios pararealizar un
recuento celular con hematocitómetro son los
siguientes:
a)
b)

El presente artículo se escribe con la intención
de ayudar a realizar un conteo celular con un
hematocitómetro o cámara de Neubauer a
principiantes, y también a técnicos o
investigadores experimentados que deseen
recordar las bases del mismo.

c)
d)
e)
f)

Primero, describiremos cada una de las partes
y los principios defuncionamiento del
hematocitómetro.

LA CÁMARA DE NEUBAUER, O
HEMATOCITOMETRO.
Se trata de una gruesa placa de cristal con
forma de portaobjetos, de unos 30 x 70 mm y
unos 4 mm de grosor.

En una segunda parte, se describe paso a paso
cómo realizar un recuento celular con
hematocitómetro para obtener unos resultados
fiables.

En una cámara simple, la porción central, que
es donde se realiza el conteo,está dividida en 3
partes.

NOTA : Durante

a

muestra celular a medir
hematocitómetro, o cámara de
Neubauer
microscopio óptico
cubre objetos
pipeta / micropipeta con puntas
buffer para diluciones / PBS, en su
caso

c

e

f

b
d
3

Fig 1. Elementos necesarios para realizar un conteo celular con Hematocitómetro

www.celeromics.com

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En la partecentral se encuentra grabada una
retícula cuadrangular.
En el caso de cámara dobles, que son las más
comunes, existen 2 zonas de conteo, una
superior y otra inferior al eje longitudinal de la
cámara.

cámara superior

Oscar Bastidas

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La reticula completa mide 3 mm x 3 mm de
lado. Subdividida a su vez en 9 cuadrados de
1mm de lado cada uno. Fig. 4 – 1
En caso de recuento de sangre, los cuadrados
delas esquinas son los destinados al recuento
de leucocitos. Al existir estos en menor número
que los hematíes, se necesitan menos líneas de
referencia para realizar el conteo.
El cuadrado central es el destinado al recuento
de hematíes y plaquetas. Se divide en 25
cuadrados medianos de 0,2 mm de lado (Fig.42) , y cada uno de estos cuadros se subdivide a
su vez en 16 cuadrados pequeños. Fig 4-3
Elcuadrado central está por tanto formado por
400 cuadrados pequeños.
CUBREOBJETOS.

cámara inferior

Fig 2. Cámara de Neubauer comercial

El cubreobjetos es un cuadrado de cristal de
aproximadamente 22 mm x 22 mm. Debe
colocarse sobre la cámara de recuento de
forma que cubra la parte central de la cámara,
delimitando un espacio entre la cámara y el
cubreobjetos de 0,1 mm.
Es común que elcubreobjetos quede
ligeramente levantado cuando aplicamos más
líquido del necesario a la cámara. Para evitar
esto, existen algunas cámaras que tienen dos
pinzas especiales para evitar que
el
cubreobjetos se levante, y la distancia sea
mayor de 0,1 mm.
PIPETA
Se trata de un instrumento de laboratorio que
permite medir alícuota de líquido con bastante
precisión. Típicamente han sido principalmente
de vidrio,pero en la actualidad se utilizan
ampliamente las micropipetas, que tienen
puntas esterilizadas desechables. Las mas
habituales están calibradas para una
capacidad máxima de 20, 200 y 1000 uL .

Fig 3. Pila de cubreobjetos, y caja.

www.celeromics.com

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Fig 4. Detalle de larejilla de una cámara de Neubauer Improved.

Conteo Celular, paso a paso
PASO 1. Preparación de la muestra.
Dependiendo del tipo de muestra a medir, se
ha de habrá de prepararar una muestra con
una concentración apta para su recuento.
Típicamente, el rango de concentraciones que
permite contar el hematocitómetro está entre
250.000 células y 2,5 millones de células por
ml.

Por debajo de 250.000...