Conteo De Microorganismos

Universidad Autónoma del Estado de Hidalgo
Instituto de Ciencias Agropecuarias
Ingeniería en Alimentos
Microbiología industrial
Medidas de crecimiento
Equipo 1:
Hernández Aguirre Javier
Lara reyes Gloria Estefani
Morales Fernández Ana María
Olvera Olvera Guadalupe Nohemí

MEDIDAS CRECIMIENTO
MÉTODOS DIRECTO
RECUENTO DEL NUMERO DE CELULASEN UNA NEUBAUER
CARACTERÍSTICAS GENERALESLa Cámara de Neubauer es un instrumento utilizado en medicina y biología para realizar el recuento de células en un medio líquido, que puede ser un cultivo celular, sangre, orina, líquido cefalorraquídeo, líquido sinovial, etc.
La cámara de Neubauer está adaptada al microscopio de campo claro o al de contraste de fases. Tiene la apariencia de un portaobjetos grueso, que en una cara tiene una placamuy delgada de metal, la cual se encuentra grabada (con la ayuda de un diamante) con un par de cuadriculas muy finas y de medidas definidas. La cámara de Neubauer cuenta también con un par de muescas que permiten colocar la muestra a analizar en dos compartimientos. Por último, la cámara de Neubauer se complementa con un cubreobjetos cuyo grosor es mayor, también, que el de los cubreobjetosconvencionales. Entonces, la altura entre el portaobjetos y el cubreobjetos se encuentra definida, así como el área de la cuadricula en el portaobjetos; por lo tanto, es posible calcular el volumen contenido en cada compartimiento de la cámara de Neubauer. De esta manera, es posible conocer el volumen de muestra celular que se coloca en la cámara y con base en la cantidad de células contadas,conociendo el volumen de líquido que admite el campo del retículo, se calcula la concentración de células por unidad de volumen de la muestra líquida inicial.

CARACTERÍSTICAS PARTICULARES
Es un cuadrado de 3x3mm, con una separación entre dos líneas consecutivas de 0.25mm. Así pues el área sombreada y marcada L corresponde a 1 milímetro cuadrado. La depresión central del cubreobjetos está hundida 0.1mm,respecto a la superficie, de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos este dista de la superficie marcada 0.1 milímetro, y el volumen comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es de 0.1 milímetro cubico, es decir 0.1 microlitro.

Fórmula de valoración (válida universalmente)

MODO DE USO

• Limpie la cámara y la laminilla de cuarzo suavemente con alcohol.
• Revise lalaminilla de cuarzo que no debe estar desbordada o quebrada.
• Coloque la laminilla de cuarzo sobre la cámara en forma vertical, esta debe quedar centrada.
• Proceda a llenar la cámara. Este paso es muy importante y definitivo en la distribución de las células. Es recomendable llenarla con micropipeta pequeña o con una jeringa ya que la cámara se llena con una gota. El llenado debe ser continuo en unsolo intento.
• La cámara no puede quedar seca esto se detecta porque en las esquinas del recuadro de llenado se ven porciones secas. Tampoco se debe inundar, la apariencia en la cámara es de líquido abundante en las terminaciones del recuadro.

CONTEO

Lleve la cámara al microscopio y enfoque el cuadro de conteo con el ocular de 4X. Observará lo siguiente.

• Si las células que va a contarson pequeñas como son las levaduras, bacterias,
etc., ubicarse en la cuadricula central y pasar al ocular de 10X. Se visualizará de la siguiente manera:

• En esta cuadricula se visualizan 25 cuadros, de los cuales se cuentan las células presentes en 5 campos, generalmente se cuentan los cuadros de las esquinas y el central, lo que garantiza un conteo aleatorio.
* Para realizar el conteose pasa al ocular de 40X, donde se visualiza cada uno de los campos y con ayuda de el carro del microscopio se desplaza la cuadricula hasta contar en todos los cuadros. El conteo en estos campos de la cámara se conoce como AP (alto poder). Con el lente de 40X cada cuadro se ve de la siguiente manera:









• Las células se cuentan cuadro por cuadro y se hace un total. Se...